153593. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Primycin termelésére
9 153593 10 maradó primyoin tartalom (2—20 jig/ml) elhanyagolhatóan kávés. Az összes hatóanyagot tartalmazó nedves (70% víztartalom) csapadékból a primycinlt oldószer keverékkel, előnyösen, vízzel hígított 'metanollal forralás, közben von- 5 juk ki. Vákuum bepárlást követően, a spontán levált primycin vízoldható szennyezései (szénhidrátok, szervetlen sok s'tib.) az anyalúgban maradnak, amelytől vákuum szűréssel könnyen szeparálhatók. Ily módon magas aktivitású. (401— 10 70% primycin tartalmú) nyerstermékekhez, igen jó kitermeléssel (70—90%) ipari méretben juífchatunk. A primycin további tisztítását (100% aktivitásig) változaítlaniul, az iparilag is jól Ihaszno- 15 sítható eljárás alapján [146.332 sz. magyar szarbadalom (1958) és pótszalb. 151.197] végeztük. A végtermék állandó fizikai és kémiai adatokkal rendelkezik, • amelyek egységességét bizonyítják. 20 Páldák: 1. A Thenmopolyspóra galeriensis laboratóriumi 25 (lombik) fermentációja. a) Inoculum táptalaj Szójaliszt 2,0% Keményítő (ainiylum solani) 2,0% CaC03 0,5% Nad 0,3% KH2 P0 4 0,1% Pálmaolaj 0,5% A pH autoklávozás előtt 8,5. A táptalajit 1,5 aitmoíszfárán 25 percig sterilizáljuk. A tfeniti módon elkészített táptalajból 500 em3 -es Erlenmeyer lombikba 100—100 cm 3 teszünk, s ezt beoltjuk a törzs spóra, ill. mycé^ lium szuszpenziójával, iRázatás 5 cm lökethosszú sík rázógépen 27 Cc-on 48—60 óráig. Az így kapott inoeulummal beoltjuk az alábbi táptalajit: b) Termelő táptalaj Szójialiszt Keményítő CaC03 Nad KH2 P0 4 Pálmadlaj Stearinsav 4,0% 4,0% 0,5% 0,3% 0,1% 0,5% 0,3% pH, autoklávozás előtt 8,8, autoklávozás 1,5 atmoszférán 25 ,pencig. E Mptalajiból az 500 chi3-es lomlbdkba 30—35 cm3 -t teszünk, ós fent leírt 48—60 órás inoeulummal 1—5%-os arányban végezzük az inoculálástt. 28 C°-on síkrázóasztalon 96—120 órát rázatjuk. Az így kapott fermentlevek primycin tartalmát biológiái értékiméréssel határozzuk meg. 40 45 50 55 60 65 2. A Thermopoly spóra galeriensis üzemi fermentációja. a) Előinoculum táptaüaij Szójaliszt 4,0% Keményítő (amylum solani) 4,0% CaC03 " 0,5% Nad 0,3% KH2 P0 4 0,1% Pálmaolaj 0,5% ph sterilizálás előtt 8,5, sterilizálás autoklávban 1,5 atm. 25 percig, vagy gőzzel 1,3—1,5 atmoszférán 1 óra hosszat. b) Inoculum táptalaj Szójialiszt 4,0% Keményítő (aimylum solani) 4,0% CaiC03 0,5% Nad 0,3% KH2 P0 4 0,1% Pálmaolaj 1,0% ph sterilizálás előtt 8,8, sterilizálás 1,3—1,5 atmoszférán 1 óra hosszat. c) Termelő táptalaj Szójaliszt Keményítő GaC03 Nad KH2P0 4 Stearinsav Pálmaotej 4,0% 4,0% 0,5% 0,3% 0,1% 0,3% 0,6% ph sterilizálás előtt 8,8—9,0, sterilizálás 1,3—1,5 atmoszférán 1 óra hoisszat. Az előinoculum és inoculum táptalajon a fermentáláis inoculum nyerése céljából 27 C-on 48—60 óra, míg a /termelő táptalajban 96—120 óra. A fermentálástt saválló acél, — vagy vasffermentorban egyaránt végezhetjük. A gomba levegőigényes, ezért a levegőztetés legalább, 1 :1 arányú, a keverés fordulatszáma pedig minimálisan 250 fordulat/perc. Ennél nagyobb mértékű levegőzitatés, vagy fordulatszám a hozamot növeli. 3. Nyerstermék kinyerése lalboraitóriumi tenyészetből. 10 liter rázott kultúrából kapott tenyésztési folyadék szüreteié sekor mért hatóanyagitartálom (510 és 530 /ig/ml) 5,2 g primycinnek (100%) felelt meg. A gyengén savanyú (pH 5*—6) fermient folyadékot felfőzve (70 C°-ra) a nryee^ lium tömeget szeparálva, a felettes folyadék aktivitása 11 /ig/ml <2,1%). A nedves csapadékot frakciónként a—tf) 1—2 liter 80%-os metanollal vízfürdőn egy-egy órát forraltuk, imajd centrifugáltuk. A felettes folyadékok: frafcción-5
