153593. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Primycin termelésére
153593 11 12 kóntí biológiai aktivitásának, ül. priimycin tartaknánalk megoszlása a (következő: fr. extraktum biol. titer primyein kitermelés fr. liter tug/.ml g % a) 2,04 1450 2,96 57 b) 1,50 600 0,90 17,3 c) 1,65 510 0,85 16,3 d) 1,20 230 0,28 5,3 e) 1,26 55 0,07 1,4 f) 1,30 28 0,04 0,7 . összes kitermelés: 5,10 98,0 10 15 20 25 Az egyesített első négy frakciót (a*—d) vákuumban 6,4 literről 1,26 literire bepárolva, a spontán levált nyersterméket szűrve, vákuumban szárítva 10,6 g iprimycint szolgáltatott. A termék biológiai értéke 41%, ami 4,35 g .tisztaterméknek felelt meg. A 10 liter fermentfolyadék összes primyein tartalmából (5,2 g) tehát 84%-os kitermeléssel izoláltuk nyerstermékéit. Az anyalúgja még további 5% primycint tartalmazott. 4. Nyerstermék kinyerése üzemi tenyészetekből. A Thermopolyspóra galeriensis 1 m3 „termelő táptalaj "-ban, üzjemi körülmények közöitt te- 30 nyészitve, leálláskor 1,600 /4g/ml primyein tartalommal rendelkezett. A tenyésztési folyadékot 80^—90 C°-ra felfőzve, pH 6—7-nél szűrőprésen melegen szűrtük. A jelentéktelen aktivitáísú (10 juig/ml) szűrletet elöntöttük. A közel 70% ned- S5 vesség tartalmú mieeliuim .csapadék közvetlenül került tovább feldolgozásra. a) Először 61,2 kg nedves csapadékot 250 liter 80%-«s metanollal 3 órán keresztül, intenzív mechanikai keverés közben forraltunk. A 'leállás után kapott "240 liter szűrlet biológiai aktivitása 2860 /ig/ml volt, ami 687 g pri'myeih tartalomnak (43%) felelt ímeg. b) A már egyszer extrahált rnyeeliutmcsapadékot egyesítettük a még nem kezelt 63,4 kg 45 csiapaidékk&fl. és a fentiekhez hasonlóan 400 liter 80%-os [nnatanolilal megismételtük a forralással kivitelezett «extrákéi ót. A szűrés után kapott 430 liter extraktum, 2000 jug/ml biológiai titerével 860 g tiszta primycint képviselt i(54%). 50 c) Végül a már kétszer extrahált {80 kg) maradék csapadékot további 400 liter metanollal főztük fel és így 50 //.g/iml akti vitással rendelkező 330 liter szűrletet l(16,5 g), — azaz 1,03% priimycin tartatommal — nyertünk. Az extrák- 55 tumok tehát a tenyésztési folyadék összes primyein aktivitásának 98%-át képviselték. 40 Az egyesített 670 liter f «frakciókat (a—b) vákuumban (40—50 C°) 91 literre párolva be, a +6 C°-on álűás közben leváló primyein csapadékot végül váfcuumszűréssel választottuk el a vízoldhaitó tisztátalanságokat tertalknazó anyalúgtól. Az anyalúg titere 40 //.g/ml volt. A vákuumban súlyállanidóságig szárított nyerstermék 1,93 kg. A 65%-os 'biológiai értékű termék 1;25 kg tiszta primycint képviselt. A tenyésztési folyadék teljes aktivitására (100%) számítva, a kitermelés 78,3%. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás Primyein termelésére, azzal jellemezve, hogy az Országos Közegészségügyi Intézetnél 650707 szám .alatt deponált új Thermopolyspóra galeriensis törzset, annak leszármia>zottjaáit, variánsait vagy 'mutánsait, szerves szénforrást, szerves nitrogénforrást, ásványi sókat és előnyösen természetes és/vagy szintetikus zsírokat, olajokat, zsíralkoholokat, ill. zsírsavakat tartalmazó táptalajon, kevert és szellőztetett alámerülő kultúrában tenyésztünk, majd a megfelelő Primyein koncentráció elérése után a fermentációs közegből a Primycint kinyerjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganaitosítási módja, 'azzal jellemezve, hogy a termelő táptalajban szénforrásként szénhidrátot, előnyösen keményítőt és/vagy cukrokat,, nitrogénforrásként nitrogéntartalmú természetes és szintetikus szerves anyagokat, előnyösen aiminosavakalt, szerves bázisokat, stavamidokait, szójalisztet, kufcoíricalekvárt, szervetlen sókként foszfátokat, nitrátokat, kloridokat, ill. karbonátokat alkalmazunk. 3. Az 1—2. igénypontok szerinti eljárás, foganatoBÍitási módja, iázzál jellemezve, hogy a táptalajhoz pálmaolajat és/vagy sztearinsavat adagolunk. 4. Az 1—3. igénypontok szerinti eljárás for ganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentációt 20—50 C°-on pH = 6—9 értéken legalább 1 :1 arányú levegőztetés mellett, legalább 200 fordulatszámú keverővel ellátott fermeritorban végezzük. 5. Az 1—4. igénypontok szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a megfelelő Primyein koncentráció elérése után a fermentációs közegből a Primycint a gomba által termelt myoeliummal együtt 5'—7 pH-nál, 80—95 C° hőmérsékleten szeparáljuk, majd a nedves mycelium csapadékról az antibiotilkumot oldószer keverékkel forralás közben oldjuk le, miajd a kivonat vákuumbepárlásakor spontán leváló magas aktivitású nyerstermékeit az .anyalúg eltávolítása után kinyerjük. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója, 6707190, Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. f.
