153561. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új antibiotikum előállítására
1? 153561 14 Streptornyces canadiensis készlet tenyésztés agar-agasron i tenyésztés rázott üvegben I oltóanyag tenyésztése fermentorban l termelő tenyésztés fermentorbain 10 A fermentációs közegnek lényegében -asszimilálható szénfonrást és nitrogénforrást, továbbá szervetlen anyagokat és adott esetiben növekedési faktorokat kell tartalmaznia; raindszsk az 15 anyagok hozzáadhatok jól definiált vegyületek vagy bonyolult keverékek alakjában, az utóbbiakat különféle eredetű biológiai termékekben találhatjuk. Asszimilálható szénforrásként felhasználhatók 20 szénhidrátok, például glukóz, szacharóz, lafctóz, dextrinek, keményítő, melasz vagy más szerves vegyületek, például cukoralkoholok: mamiitól, vagy egyes szerves savak: tejsav, citromsav, bodtősav. Bizonyos állati vagy növényi olajok, 25 mint pl. a szaloinnaolaj vagy a szójaolaj, előnyösen helyettesíthetik vagy kiegészíthetik á fentemlített szénforrásokat. Az alkalmas asszimilálható nitrogénforrások rendkívül változatosak. Lehetnek nagyon egy- 30 szerű vegyi anyagok, mint a nitrátok, szervetlen és szerves ammóniumsók, karbamid, aminosavak. Ezek bevihetők a nitrogént főképp fehérje alakjában tartalmazó összetett termékek: > kazein, laktalbumin, siker és hidrolizátumai, S5 szójaliíszt, arachisliszt, halliszt, húskivonat, élesztő, szeszmoslék, kukoricalekvár alakjában. A szervetlen adalékok közül egyesek tompító vagy közömbösítő hatásúak lehetnek, mint például az alkáli- és alkáliföldíémfoszifátok vagy 40 a« kalcium- és magnéziumkanbonát. Mások a Streptomyces oanadiensiis fejlődéséhez és az antibiotikum termeléséhez szükséges ionegyensúlyt tartják fenn, mint például az alkáli- és alkálifoldfémkloridok és szulfátok. Végül egye- 45 sek specif ikusabban hatnak a Streptornyces canadiensis aktiváto>raiként, ilyenek a cink-, kobalt, vas-, réz- és mangánsók. A fermentációs közeg pH-jának a tenyésztés kezdetén 6,0 és 7,8, előnyösen 6,5 és 7,5 között 50 kell lennie. A fermentációra legelőnyösebb hőmérséklet 25—35 C°, de kielégítő termelés érhető el 23 és 38 C° között. A fermentáció levegőztetése ©lég széles határok között változhat. Azt találtuk azonban, hogy percenként 55 0,3—2 liter levegő a tenyészközeg minden literére jól megfelel.' A legnagyobb antibiotikumkitermelést 4—9 napi tenyésztés után kapjuk, ez az idő lényegében a használt közegtől függ. A fent elmondottakból kitűnik, hogy a Strep- 60 tomyees canadiensis 8036 R.P. antibiotikum termelése céljából való tenyésztésének általános körülményei meglehetősen nagy mértékben változhatnak, és az adott körülményekhez alkalmazhatók. 65 A 8036 R.P. antibiotikum a fermentációs léből különféle eljárásokikai izolálható. A fermentációs lé megszűrhető 7 vagy nagyabb pH-nál, de ilyen körülmények között az aktivitás jelentős része a szűrőlepényben marad, és így abból is ki kiéli vonni a hatóanyargot. Ennélfogva előnyösebb a szűrést 5 pH alatt, célszerűen 2 pH körül végezni. Ilyen körülmények között az aktivitás a szűrőlepényben marad, és onnan 3 és 7 pH között kis molekulasúlyú alkoholt, pl. metanolt, etanolt, propanolt vagy legfeljebb 5 szénatomos alifás alkoholok keverékét tartalmazó vízzel extraháljuk. A legalkalmasabb oldat olyan keverék, amelynek összetétele a nedves szűirőJepénnyel való rázás után 60% metanol és 40% víz. A fermentációs lé átbocsátható továbbá egy nagyporozitású erős anionos ionkicserélővel töltött oszlopon, majd eluálható egy elektrolitot tartalmazó vizes alkoholos oldószerrel, például vizes metanollal. A fermentációs levet közvetlenül is extranálhatjuk 4-nél kisebb, előnyösen 2 körüli pH-nál egy kis molekulasúlyú, vízzel nem elegyedő alkohollal, például butanoMal. A nyeirs termék a fentemlített alkoholos vagy vizes alkoholos oldatokiból az oldatnak kis térfogatra való bepárlása útján különíthető el; a bepáriást 40 C° alatt csökkentett nyomáson végezzük. Kifagyasztiásra vagy a 8036 R.P.-t rösajszul oldó oldószer, pl. vízmentes etanol, egy keton, egy észter, egy klórozott szénhidrogén, benzol vagy hexán hozzáadására a nyers antibiotikum kicsapódik. Ezután a 8036 R.P. "megtisztítható egy erős anionos jellegű, nagypoirozitású ionkicserélő gyantán * adszorbeáltatwa, majd olyan vizes alkoholos oldattal eluálva, amely elektrolitként literenként 5—50 g nátrium-, ammónium-, kálium-, kalcium- vagy magnéziumklo'ridot tartalmaz. Az eluátumot ezután 40 C° alatt csökkentett nyomáson kis tárfogatra pároljuk : be, és' a koinoehtrátumot áramló- desztillált vízzel szemben regenerált ceUulózihártya segítségével dializáljuk. A szervetlen sók és különféle szennyezések a vízzel eltávoznak, a 8036. R.P, pedig teljes egészében visszamarad, a' dializált oldatban. Ezt az oldatot butanol hozzáadásával csökkentett nyomás alatt azeoitróposan igen kite térfogatra pároljuk be. A tisztított antibiotikumot a vizes koncentrátumból kicsapjuk egy olyan oldószereleggyel, például acetonos izopropanollal, amelyhez adott esetben étert vagy izopropiloxidot .adunk olyan arányiban, hogy az elegy ne váljon szét külön fázisokra a vizes fázissal való egyesüiiésikoir. Lehetségese, hogy a leírt többféle módszert egymás után alkalmazzuk változó sorrendben, vagy többször megisniiételjük a gyártás követelményei szerint, hogy a 8036 R.P.-t a tervezett alkalmazásnak legmegfelelőbb alakban kapjuk. ' Az alábbi példák a találmány gyakorlati alkalmazásmiódjiainak szemléltetésére szolgálnak anélkül, hogy annak terjedelmét bármiképpen is korlátoznák. A toviábbiakiban az aktivitást 7
