153561. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új antibiotikum előállítására
153561 15 18, mindig diffúziós módszerrel, biológiai elemzéssel határozzuk meg, Staphylococcus aureust használva érzékeny 'baktériumként, és tisztla 8038 R.P.-t összehasonlító anyagként. Az aktivitást egységekben i(E) fejezzük ki mg-ként szilárd anyagok és ml-ként oldatok esetében (az egység az a legkisebb mennyiség, amely 1 ml alkalmas táptalajban oldva meghatározott körülmények között megakadályozza a Staiphyioooccus aureus 209 P törzs szaporodását. 1. példa Egy 170 literes fermentarba a következő anyagokat tesszük: NZ-amin, E típus Húskivomat GlukózHhidrát Szójaolaj Agar-agar Vízzel kiegészítve A keverék pH-jának 90 ml 10 n nátronlúggal 7,05-re való beállítása után a közeget 122 C°-os gőznek 40 percig tartó átbuborékoltatásával sterilizáljuk. Lehűtés után a táptalaj térfogata 120 liter és a pH-ja 6,90. Ezután beoltjuk 200 ml Erlenméyer lombikban levő rázott Streptomyces eanadiensis tenyészettel. A tenyészet 27 C°-on való 32 órai rázás és steril levegővel való levegőzés közben elszaporodik, s ezzel alkalmassá válik a termelő tenyészet beoltására. A termelő tenyészetet egy 800 literes fermsn' torban valósítjuk meg a következő anyagokkal: kukoricalekvár 8 kg glukóz-hidrát 4 kg szójaolaj 8 liter kalciumkarbonát 4 kg ammóniumszulfiát 0,400 kg kobal tklorid-hexaihidrát 6 g vízzel kiegészítve 370 literre A 6,20 ipH-jú közeget 122 C°-os gőznek 40 percig tartó átbiborékoltatásával sterilizáljuk. Lehűtés után a tápközeg térfogata 400 liter, és a pH-ja 7,10. Ekkor beoltjuk a 170 literes fermentoirban a fent leírt módon készült 40 liternyi oltó tenyészettel. A tenyésztést 27 C°-on 156 óra alatt hajtjuk végre, miközben percenként 260 fordulatszámú turbinával keverjük és óránként 15 ms steril levegővel levegőztetjük. Ekkor a közeg pH-ja 7,25, a fermentációs lé térfogata pedig 400 liter. A fermentációs lében jelenlevő antibiotikum mennyisége 1625 egység/ - ml. 2. példa A fentiekkel azonos körülmények között előkészített az oltótenyészettel beoltott tápközeget 800 literes fermentorban 156 óra hosszat 33 C°on tartunk, miközben egy percenként 160 fordulatszámú turbinával keverjük és óránként 25 m3 steril levegővel levegőztetjük. Ekkor a közeg pH-ja 7,45 és a lé térfogata 340 liter. A fermentációs lében 3215 egység/ml antibiotikum van. •5 3. példa Az 1. és 2. példában leírt módon készült fermentációs leveket összekeverjük. 740 liter 2420 10 egység/ml antibiotikum tartalmú, 7,3 pH-jú fermentációs levet keverővel ellátott tartályban 10 n kénsavval beállítunk 2 pH-ra. Ezután 18 kg szürkés elősegítőt adunk hozzá. A keveréket szűrőprésen szűrjük, és a szűrőlepényt 260 liter 15 csapvízzel mossuk. A gyakorlatilag inaktív szüredéket és mosóvizet a csatornába engedjük. A 1200 g szűrőlepényt 388 liter metanolos (268 1) vízben 720 g (120 1) keverés által szuszpendáljuk. A szusz-1200 g penzió látszólagos pH-ját 10 n nátronlúggal 7-re 60 ml 20 állítjuk be, a keverést 1 óra hosszat folytatjuk, 120 g majd a levet szűrőprésen átszűrjük. 105 literre A szüredéket összegyűjtjük, és a szűrőlepényt 150 liter 70 térfogatszázalékos metanollal mossuk. Az egyesített szüredék és mosófolyadék 25 (530 liter) antibiotikum tartalma 3440 egység/ml. A szűrőilepényt eldobjuk. Az alkoholos szüredéket csökkentett nyomás (20 torr) alatt 35 C°-on bepároljuk 5,2 liter térfogatra. Az antibiotikumot 40 liter etanol hozzáadásác0 val kicsapjuk, a csapadékot centrifugáljuk és etanollal mossuk, majd szárítószekrényben 5 torr nyomás alatt megszárítjuk. Ily módon 885 g világosszürke terméket kapunk 1790 egység/ mg antibiotikum tartalommal. 4. példa A 3. példában leírt módon készült 880 g nyers antibiotikumot feloldunk 20 liter 7 pH-s vízben. 40 A vizes oldatot leszűrjük, majd átbocsátjuk egy 35 liter kloridfázisban levő Dowex ionkicserélő gyantát tartalmazó oszlopon. Az átfolyt foíyadékot csatornába bocsátjuk. A gyantát 50 liter vízzel, majd 80 liter víz-hangyasav elegy-45 gyei (90 : 10 térfogat), majd 80 liter metanol-víz-hangyasav eleggyel (80 :10 :10), végül 80 liter metanol-víz eleggyel (80 :20 térfogat) mossuk. Ezután az antibiotikumot 300 liter 10 g/l káliumkloridot tartalmazó metanol-víz eleggyel 50 (80 : 20 térfogat) eluáljuk. A 120 liter térfogatú középső frakciót 20 torr nyomás alatt 40 C° alatti hőmérsékleten 5 literre töményítjük, és a koncentrátumot 24 óra hosszat desztillált vízzel szemben egy regene-55 rált oellulózhártyán át dializáljuk a szervetlen sók és különféle szerves szennyezések eltávolítására. A dializáit oldatot (6,8 liter), amely az eluátum teljes aktivitását tartalmazza, 20 torr nyoéo más alatt 0,8 literre pároljuk be. A kapott koncentrátumhoz hozzáadunk 5 térfogat acetont, mire az antibiotikum káliumsója alakjában kicsapódik. Szűrés, acetonnal való mosás és egy éjjelen át 35 C°-on 2 torr nyo%5 más alatt való szárítás után 195 g világosbarna \
