153375. lajstromszámú szabadalom • Eljárás acilezett tetrapeptid-származékok előállítására

21 153375 22 -L-triptofaral-L-metionil-L-aszpanagil-L-fenilalaninamid helyett 1 rész .N-Jt-butiloxikarbonil-L-alanil-L-fenilalanil-L-iaoleucinglicil-'L-tri^ptoifanil-L-metionil-I^aszpairagil-L-íenilialaniriamidoí! vagy 1 rész N-acetil-, N-benzoil-, N-t-butiloxikarbonil-L-alanil-, N-pivaloil-ß-.alanil-, N-benzilpxikarbonil-^-alaniW, Itf-aeetil-A-alanil-, N-^-alanil-, vagy N-karbamoil-L-tóptofanil-I^metionil-L-aszparagü^I^fenilalaniínamidot alkalmazunk és így a megfelelő izotoniás steril injektálható vizes oldatokat kapjuk. 40. példa: 225 nesz N-t^butüoxikarbanil-L-triptoí,anil-L- „ -metiioninlhiidrazidnak 500 rész vízmentes tetaahidrafuránnal készített szuszpenzióját —20 C'°ra hűtjük és 36,5 rész vízimentes sósavat tartalmazó 500 rész vízmentes tetralhidrdfuránt —20 C° és —25 C° közlött erős keverés mellett hozzáadagolunk. A kapott oldatot azután 61 rész n-butilniitrittel hozzuk, reakcióba es a keverést —30 C° és —25 C° között még további 6 órán át folytatjuk. Az enyhén zöldes oldatot 0 C°-on 140 rész L^aszparagil-LHfenilalaninianaidnak 2000 nesz dimtetiilfiormiamiddal, 100 rész vízzel és 151,5 rész trtetilaminnal készített oldatához adjuk. A neak'tíóelegyet 2 napon keresztül 0 C°-on állni hagyjuk, majd 10 000 rész jeges vizet .adunk hozzá.' Az elegyet szűrjük, a szilárd maradékot vízzel mossuk és etanaalból kristályosítjuk. A kapott N-t-butiloxikanbonü-I^triptafanil-L-mietionil-L^aszpaPpagil^L-fenipalastiinanád gázfejlődés közben 209—210 C°-on olvad. Az 'N-t^butiloxikaoibonil-L-^ri'ptofanü-L-mpetaoninmdrazid kiindulási anyagot úgy állíthatjuk elő, hogy 200 rész I^raetioninniietilészter-riidrokloridnak 1500 rész Moroformmal készítettszuszpenzilóját 0 C°-on elkeverjük és 101 rész tóetüaminnal hozzuk reakcióba. Á keverést 0 C°-on addig végezzük, míg az összes, szilárd rész fel nem oldódik. Ezután 0—5 Cf-on 304 rész N-t-butüoxikarbonil-L-tri'ptafánt, majd 206 rész N,N'-diciklohexilkanboidiimidet adunk hozzá. A reaktióelegyet 18 órán keresztül 0 C°-on állni hagyjuk, utána megszűrjük, A szürletet egymás után 10%-os nátriumklorid oldattal (200 rész), 10%-os citromsav oldattal (200 rész), 10%-os nátriumiklorid oldattal (200 rész), In káliuimhidrogérikarboniáttal (200 rész) és 10%-os nátriuimklorid oldattal '(3 alkalommal 200—200 résszel) mossuk. Vízmentes magnéziumszulfáttal szárítjuk lés csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 800 nesz diizopnopilétletrben feloldjuk és az oldatot 1 órán át 0 C°-on tartjuk. A kristályokat azután szűréssel összegyűjtjük és 40 C°-on csökkentett nyomáson szárítjuk. Az így kapott N-t-butiloxikarbonil-L-triiptofanil-L-metiioninimetil'észjter színtelen tűalakú kristály, olvadásipontja: 98—99 C. Ezután 225 résznyi terméket 500 rész metanolban feloldunk, az oldatot 0 C°-ra hűtjük és 55 rész, 100%-os hidrazinhidráttai reakcióba hozzuk. A reakcióeiegyet 16 órán keresztül 20—22 C°-on állni hagyjuk, maijd megszűrjük. A szilárd maradékot metanollal mossuk és csökkentett nyomáson 40 C°-on megszárítjuk. Az így nyert N-t-butiloxikarbonü-I^triptóarul-.I^rnetioninMdrazid gázfejlődés közben 177—178 C°-on olvad. Az I^asziparagu-L-fenüalanmaimid (gázfejlődés köziben 188 C°-On olvad) előállítása önmagában ismert módon történik. 42. példa: 360 rész N-t-butiloxikarboml-L^riptöfanil-I^metioninhidraziidnak 5200 rész dimetilfoirmiaimidáal készített oldatát —10 C°-ra lehűtjük és 2000 rész In sósavat, majd 4350 rélsz 0,2n nátriumnitri'tet adunk hozzá. Az elegyet 3 percen keresztül —10 C°-oin keverjük és 30 000 rész vizet, majd 5800 nesz In nátriumihidroigéníkarbonáitot, később 4000 rész metílénkloridot adunk hozzá. A kis mennyiségű szerves réteget a reakeiókeverékből eltávolítjuk és a vizes részt mtetilénkloriddal extraiháljuk úgy, hogy egyenként 4000 részt alkalmazunk. Az egyesített szerves rétegeket és az extraktumokat vízmentes magnéziumiszíulfáttal végzett 5 perces keveréssel szárítjuk, miajd az elegyet megszűrjük. A szürlieitet azonnal —H10 C°-on 274 rész L-aszparagil-L-fenilalaninmetilészter-jhidrakloridinaik 10000 rész dtaietüformaimiddal és 262 rész trfetilaminnal készített oldatához adjuk. A reakcióelegyet 24 órán keresztül 0 C°-on tartjuk, majd a metilánkloridot csökkentett nyomáson 0 C-otn eltávolítjuk. Az elegyet ezután még további 20 órán keresztül 0 C°-on, majd ezután 4 órán ót 20^—22 C°-on állni hagyjuk. Ekkor 40000 rész metilénkloiridot adagolunk hozzá és az oldatot egymás után 5%-os citromsav oldattal (20 000 rész) és vízzel (2 alkialommal egyenként 20000 résszel) mossuk. Az oldatot azután vízmentes magnéziumszulfalttal szárítjuk és (megszűrjük, A szürletet csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradákot vizes metanolból kristályoisítijukv Az így nyert N-t-butiloKikarbonil-L-triptofanil-'L-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 w 218 rész N-t-butiloxikarbonil-L-triptofán-2,4,5- 15 -triMórtfenilésztert, 185 rész L-metionil-L-aszparagil-L-fenilalaninamidot 45,6 rész Metilamirat, 4000 rész diimetilfonmaimidöt és 500 rész vizet 48 órán keresztül 0 C°-on, majd 24 órán át 20'— 25 C°-qn keverünk. A reafccióelegy pH-ját 0, C°- 20 on 2n sósavval gondosan a 2-es értékre állítjuk be, majd keverés közben 15 000 rész jeges vizet adunk hozzá. A szilárd terméket szűréssel összegyűjtjük, vízzel mossuk, majd 8000 rész etanollal enyhén forraljuk. Az elegyet lehűtjük és 25 megszűrjük, majd 'a szilárd maradékot ,etanollal jnossuk, 40—50 C°-on csökkentett nyomáson szárítjuk. A kapott N-t-butiloxifcarbonil-L-triptofanil-L-metionil-L-iaszparagil-L-fenilalaninamid gázfejlődés közben 209—210 C°-on olvad. 30 A kiindulási anyagként alkalmazott L-metionu-L-Haszparagil-I^enüalaninamid (olvadáspont: 223—'2215 C°) előállítása önmagában ismert módon történik. 35 41. példa: .1