153131. lajstromszámú szabadalom • Új mikrobiológiai eljárás
153131 sara is a konidium-szuszpenziók a legalkalmasabbak, minthogy ilyenekkel tudjuk a beoltandó mennyiséget a legcélszerűbben adagolni és ilyen szuszpenziókkal tudunk a legkönnyebben steril módon dolgozni. A steril mioéliumot viszont a munka megkezdésekor előbb egy keverőberendezésben homogenizálni .kell. A találmány szerint nyert 6-imetil-J8 ' 9 -ergolén-8-karbonsavból fél-szintótikus úton értékes farmakológiai tulajdonságokkal rendelkező új származékok egész sorát állíthatjuk elő. Emellett egy meghatározott eljárásmód szerint, amely ugyancsak a jelen találmány részét képezi, a 6-metil-ZÍ8 ' 9 -ergolén-8-karbonsavat igen egyszerű módon és jó termelési hányaddal lizergsawá lehet átalakítani, amely azután értékes közbenső termék különféle nagyértékű gyógyszer, mint pl. a klinikailag széles körben oxitocikumként alkalmazott ergobazin és metilergobazin, valamint az eddig ismert legerősebb szerotonin-antagonista, az 1-metdl-D-lizergsav-(+)-butanolamid-(2') előállítása céljaira. A Claviceps paspali Stevens et Hall NRRL 3080 jelzésű új törzs elkülönítése és szaporítása pl. az alábbi módon történhet: Egy szklerócium belsejéből egy kis szövetdarabot steril körülmények között kiveszünk és sörcefre-ágárra visszük át. (összetétel: 250 iml komlózatlan világos sörcefre, 17% szárazanyagtartaloimmal, 18 g ágár-ágár; desztillált vízzel 1 literre feltöltve; pH = 5,2.) Az agáron egy kerek telep fejlődik ki, amely 14 nap alatt (24 C° hőmérsékleten tartva) 15 mm átmérőjűre növekszik. Ez a telep az agárra felfekvő, kb. 1 mm vastag, pszeudoszklerociális szerkezetű bőrből és egy efölött kifejlődött, fehér légmicélium-párnából áll. Az agárba egy barna színezőanyag diffundál be. Koriidiumok nem képződnék. Ezt a telepet egy spatulaval darabokra osztjuk és e darabokat egy kémesőbe visszük, amely 12 ml alábbi összetételű agár-táptalajt tartalmaz: sörcefre 500 ml kukoricalekvár (szárazanyag) 60 g tejsav 1 ml ammóniumkloridoldat 4,8 pH-ig ágár-ágár 20 g desztillált vízzel feltöltve 1 literre Az inokulum minden darabja körül egy kis kolónia alakul ki, amely eleinte fehér, később vörösesbarna micéliumból áll. 10 nap múlva a hypha-csúcsokon fconidiumok kezdenek lefűződni. 20 nap múlva már elegendő konidium képződött ahhoz, hogy vizes konidium-szuszpenziót lehessen készíteni. Ezzel a szuszpenzióval 20 ferde ágáros kémcsövet (a fenti összetételű ágáros táptalajjal) oltumk be. A kultúrákat 24 C° hőmérsékleten inkubáltatjuk. A konidiumok 24—26 óra múlva csíráznak ki. 6 nap múlva az agár felülete finom fehér micéliummal van egyenletesen bevonva; 10 nap múlva barnásszürke, finoman ráncos micéliumtakaró kép-10 15 25 30 35 40 45 50 53 60 65 ződött, amely szorosan felfekszik az agáron és csupán rövid levegő-hyphák vannak rajta. Ezeken konidiumok fűződnek le. 12 nap múlva a micéliumban több helyen központok alakulnak ki, amelyekben egy vörösesbarna folyadék apró cseppecskéi választódnak ki. Ezek a cseppecskék 1—3 mm átmérőt érnek el és rövidesen tejszerűen zavarosak lesznek a nagyszámú konidium következtében. 16—18 nap múlva a konidiuinképződés gyakorlatilag lezárult, Egy 2 cm átmérőjű kémcsőben 12 ml ágár-táptalajt tartalmazó ferde agár kultúrában kb. 108 konidium termelődik. Az alámerülő kultúra tenyésztésének céljaira először egy előkultúrát készítünk az alábbi módon: ' Közegként 4,5%-os vizes malátaikivónat-oldatot alkalmazunk, amelynek pH-értéke 5, liter ilyen oldatot egy 2 literes Erlenméyer-lombikban 20 percig sterilizálunk 110 C° hőmérsékleten, majd egy 15 napos ágáros kultúrából vett 6.108 konidiummal beoltjuk, majd forgó rázógépen 3 napig inkubáltatjuk 24 C° hőmérsékleten. Finom micélium-pelyheket tartalmazó sűrű kultúra képződik. Ezek a pelyhek egy laza hypha-csomóból állnak, átmérőjük 2—4 mm. A kultúrában alkaloidok nem mutathatók ki. Nagyobb mennyiségű előkultúra előállítására 10—10 liter fenti összetételű közeget tartalmazó üveg-fermentorokat egyenként 6.109 konidiummal beoltunk és 23 C° hőmérsékleten 3 napig inkubáltatjuk, percenként 10 liter levegővel szellőztetve és percenként 300 fordulattal keverve. A habzás leküzdésére szilikon-emulziót alkalmazunk. Az így fermentorokban tenyésztett kultúrák ugyanolyan tulajdonságokat mutatnak, mint a rázott kultúrák, A termelő kultúra céljaira az alábbi összetételű tápoldat bizonyult különösen alkalmasnak: szorbit borostyánkősav KH2 E0 4 EgS04 FeSO4 .7H 2 0 ZnSO4 .7H 2 0 desztillált vízzel feltöltve pH ammóniával beállítva 50 g 36 g 2 g 0,3 g 1 mg 10 mg 1 literre 5,4 Ezt a tápoldatot egy 3 napos előkultúra 10%-ával beoltjuk és 100 ml-es adagokban, 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokban, egy reciprok^működésű rázógépen 23 C° hőmérsékleten inkubáltatjuk. Más kultúrákat hasonló módon, egy 170 liter tápközeget tartalmazó, rozsdamentes acélból készült fermentorban tenyésztünk. Ezeket percenként 170 liter levegővel szellőztetjük, eleinte percenként 70, később percenként 180 fordulattal keverve. A habzás leküzdésére szilikon^emulziót alkalmazunk. Ily módon számos egyforma mieélium-részecskéből álló kultúrákat kapunk. E micéliumrésaecskék átmérője kb. 5 mm; az egyes részecskék egy pszeudo-parechimás szövetből álló, kb. 1 mm átmérőjű gömbölyű tömör magot tar-2
