153131. lajstromszámú szabadalom • Új mikrobiológiai eljárás
153131 talmaznak. Ez a mag csillagszerűen elrendezett, kb. 2 mm hosszú, párhuzamosan elrendezett hyphákból álló nyúlványokat hordoz. A kb. 12 napos tenyésztési idő végén a micélium sötétbarna színű, a szűredék pedig élénk vörösesbarna színeződést mutat. A pH-érték csupán lé-. nyegtelen mértékben változik. Az ily módon kapott kultúra-szüredék kolorimetriás módszerrel meghatározott összalkaloida-tartalma 620 mg/liter, 300 molekulasúlyra számítva. A papírkromatográfiai úton történő meghatározás során a kapott alkaloidelegy az alábbi összetételt mutatja: 6-metil-.Zl8 ' 9 -ergolén•8-karbonsav valamint csekély mennyiségű lizergsav és izolizergsav 86,5% lizergsavamid 3,9% izolizergsavamid 3,9% ergobazin 1,0% ergobazinin 0,5% klavin-alkaloi dok 4,2% A 6j metil-./l 8 ' 9 -ergolé : n-84carbonsav elvileg különféle módszerekkel nyerhető ki a kultúra-szüredékből. Előnyösen oly módon járunk el, hogy a kultúra-szüredéket valamely bationcserélő gyantával, pl. Dowex 50 vagy Amberlite IR 120 gyantával kezeljük, majd a terméket a gyantáról híg ammóniával való kezelés útján oldjuk le, az eluáturnot bepároljuk és a terméket az oldat pH-értékének az izoelektromos pontra való beállításával kristályosítjuk. Az így kapott 6-metil-z(8 ' 9 -ergolén-8-kiarbonsavat bázisos vegyszerekkel való kezelés vagy egyszerű hevítés útján alakíthatjuk át lizergsawá. Előnyösen pl. oly módon járunk el, hogy a 6-metil-zí8 ' 9 -ergolén-8-karbonsav híg vizes nátriumhidroxidoldattal készített oladtát huzamosabb ideig hevítjük 100° hőmérsékleten, majd lehűtjük az oldatot és annak pH-értékét a lizergsav izoelektromos pontjára állítjuk be. A kultúra-szüredéket közvetlenül lizergsavra is feldolgozhatjuk, pl. oly módon, hogy az oldat bepárlása után a 6-metil-zl8 > 9 -<ergolén-8--karbonsavat alkoholos ammóniaoldattal kivonjuk a bepárlási maradékból, majd a kivonat hevítése útján a 6-metil-/J8 ' 9 -ergolén~8~karbonsavat lizergsawá izomerizáljúk és ezt a. fent leírt módon kinyerjük az <oldatból. Eljárhatunk azonban oly módon is, hogy a kultúra-szüredék ioncserélő-gyantával történő feldolgozása után a 6-metil-zl8 ' 9 ~ergollén-8-karbonsav ammonias oldatát közvetlenül vagy lúg hozzáadása után hevítjük, amikor bekövetkezik a lizergsawá való izomerizálódás. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik; megjegyzendő azonban, hogy a talál"mány köre egyáltalán nincsen ezekre a példákra korlátozva. A példákban a hőmérsékleti edatok Celsius-fokokban értendők; a megadott olvadáspontok korrigált értékek. 1. példa. 6-metil-zJ8 ' 9 -ergolén-84iarbonsav. 5 Az új Claviceps paspali Stevens et Hall törzs kultúrájának 5 liter szüredékét, amelynek kolorimetriás úton meghatározott össz-ergoilinszármazék tartalma kb. 500 mg/liter (300 molekulasúlyra vonatkoztatva) és amelynek pH-értéke 10 5,6, egy 115 cm magas, 2,8 cm átmérőjű oszlopon, amely 500 g Amberlite IR 120 gyantát (H+ -alakban, vízzel beiszapolva) átszűrjük. Az oldat átfolyatási sebessége 500 ml/óra. Azután az oszlopot 1 liter vízzel mossuk, majd a 6-me-15 til-zl8 > 9 -ergolén-8-karbonsavat 5%-os vizes ammóniaoldattal eluáljuk. Az 500 ml-es frakciókban felfogott eluáturnot ibolyántúli fluoreszcencia és Keller-féle színreakció (FeCl3-jégecet, tömény kénsav) útján vizsgáljuk ergolinszármaü0 zék-tartalomra. Az első négy frakciót (összesen 2 liter) 13 mm Hg-oszlop nyomás alatt, 30° hőmérsékletű fürdőben 500 ml térfogatra bepáröljuk, majd pH-értékét jégeoettel 5,5-re állítjuk, a levált gyantát (amely negatív Keller-féle 25 színreakciót ad) kiszűrjük, a szüredékét vákuumban kb. 25 ml térfogatra bepároljuk, 30 ml metanolt adunk hozzá, az oldatot rövid időre felforraljuk, majd 5° hősmérsékleten néhány óra hosszat állni hagyjuk. A kikristályosodott 30 savat leszűrjük, vízzel, majd metanollal mossuk és 80° hőmérsékleten, vákuumban 2 óra hosszat szárítjuk. Az ammonias éluátum további hét frakciójából ugyanilyen módon történő feldolgozás útján még további mennyiségű kris-35 tályos 6-metil-zl8 ' 9 -ergolén-8-karbonsavat nyerhetünk ki. A nyers sav tisztítása oéljából a kristályosított termékeket egyesítjük, 5%-os alkoholos ammóniaoldatban oldjuk, az oldatot szűrés után 40 2 n ecetsavoldattal 5,5 pH-értékre állítjuk, vízfürdőn rövid ideig melegítjük, majd néhány óra múlva a kikristályosodott savat leszűrjük, vízzel, majd metanollal mossuk és vákuumban, 80° hőmérsékleten megszárítjuk. Az így kapott 45 termék 243—245°-on bomlás közben olvad; [a]D = _,180° (0,1 n iNaOH). A termék a lizergsavhoz hasonló Keller-féle, van Urk-féle és Ehrlich-féle színreakciót, ad; vékony rétegű kromatogramja kovasavgélen, al-50 kohol és 25%-<os ammóniaoldat 9:1 arányú elegyével: R/ = 0,4 — 0,45. A folt ElhrHch-féle reagenssel bepermetezve kék színeződést ad. 0,1 n NaOH Ibolyántúli színkép: hnax log « = SS = 217,5) 4,56; 282 (3,79; 2Ö2) 3,74; minimum 252 millimikrónnál. Infravörös színkép: jellemző sávok 3340, 2275 (széles), 1674 és 1580 cm-1 értéknél (nujolban). 60 Hidroklorid: A fent leírt módon előállított 6-metil-d8 ' 9 -ergolén-8^karbonsavból híg sósavval nyert hidrokloridot vízből és híg sósavból átkristályosítva 65 257—259°-on bomlás közben olvadó sót kapunk: 3
