153083. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikumok előállítására
153083 7 8 Lemezes próba: Egy Petri-cséázében egy kb. 3 mm vastag steril ágár-alaprétegre (maláta-ágár; 2%-os ma* láta-kivonat, a Schweiz. Ferment A. G. gyártmánya) egy 1 mm vastag csíráztató réteget (2%-os Difco—Bacto—Agar, a vizsgált mikroorganizmus sejt- vagy spóra-szuszpenzió alakjában) vittünk fel egyenletes eloszlásban, megfelelő sűrűségben (koncentrációban). A gátló hatás mértékéül a Rhi 12—648 antibiotikum acetonos oldatával átitatott 6 mm átmérőjű szűrőpapír-korongoeskák körül képződött gátlási zónák átmérője szolgált, amelyet a lemezek megfelelő módon történt irikubáltatása után mértünk. A megadott gátlási zóna-átmérők milliméterekben értendők: az értékek több mérés középértékei. A táblázatra vonatkozó további részleteket az alábbi jegyzetek tartalmazzák: *) = a konoentráci ó-adatok a negatív tizes logaritmusok kitevői, vagyis 3,0 = 1:1000. A = leolvasás 16—20 órai inkubáció (37 C°-on) után; i B = leolvasás 24—48 órai inkubáció (27 C°-on) után. Hígítási próba: Az új Rhi 12—648 antibiotikum 1%-os acetonos oldatát iontalanított vízzel hígítottuk. Ily módon a végső koncentráció (a táblázatban megadott értékek) tízszeresének megfelelő oldatokat állítottunk elő és edényenként a végső térfogat (4 ml) 10%-ának megfelelő mennyiségű, tehát 0,4 ml oldatot adagoltunk be. A vizsgálandó organizmus szuszpenziójaként élesztők esetében kétnapos, rázógépen 27 C° hőmérsékleten nevelt kultúrákat, rnicélium- (és konidium-) képző gombák esetében pedig 0,1% nátrium-laurilszulfonátokat tartalmazó steril vízzel készített konidium-szuszpenziókat alkalmaztunk. További részletek az alábbi jegyzetekben olvashatók: **) = a megadott koncentrációk, mint *) alatt; zárójel nélküli számok: legalacsonyabb még teljesen vagy erősen gátló koncentrációk; zárójeles szám dk: a megadott koncentrációig gyengébb, de még világosan észrevehető gátlás mutatkozik. M = a próbát 2%-os malátalévél végeztük; leolvasás 16—20 óra múlva; inkubálás 37 C°-on. O = a próbát az M.. alatti módon végeztük; leolvasás 24—48 óra múlva; inkubálás 27 C°-on. A Rhi 12—648 antibiotikum erős gátlóhatást mutat a tumorsejtek szaporodásával szemben is és így antimitotikus szerként is használható. A szer e hatását tumorsejtek (P 815 egér-mastocytoma sejtek) szaporodásának in vitro és in vivo gátlása alapján határoztuk meg. Az ilyen tumorsejtek erre alkalmas tápoldatban 40 órán belül eredeti számuk négy-ötszörösére szaporodnak. Az Rhi 12—648 antibiotikum e sejtekkel szembeni DE50 értéke (az a koncentráció, amely ezt a szaporodást 50%-osan gátólja) 10-7 ' 5 g/ml. Az Rhi 12—648 antibiotikum akut toxikussága fehér egéren i. v. 175 mg/kg. Az Rhi 12—648 szedatív (nyugtató) és görcsgátló hatással is rendelkezik és ezért különféle pszichikus és neurotikus zavarok, mint pl. alvás-zavarok gyógykezelésére is, használható. Az új Rhi 12—648 antibiotikum és származékai a gyógyászatban pl. kiszerelt gyógyszerkészítmények alakjában alkalmazhatók. Ezek a készítmények az említett vegyületeket enterális, parenterális vagy lokális alkalmazásra megfelelő szerves vagy szervetlen hordozóanyaggal kombinálva tartalmazhatják. Ilyen hordozóanyagokként olyan anyagok' jöhetnek tekintetbe, amelyek a hatóanyagként szereplő új ve^ gyületekkel nem reagálnak; ilyenek pl. a zselatin, tejcukor, keményítő, magnéziumsztearát, ^ talkum, növényi olajok, benzilalkohol, gumiarabicum, polialkilénglikolok, vazelinok, koleszterin és más ismert gyógyszer-vivőanyagok. A gyógyszerkészítmények tabletták, drazsék, porok, krémek, végbélkúpok vagy emulziók alakjában készíthetők el. E készítmények adott esetben sterilizálhatok és/vagy segédanyagokat, mint tartósító, stabilizáló, nedvesítő vagy emulgáló szereket is tartalmazhatnak. Hozzáadhatok az ilyen készítményekhez más, gyógyászati szempontból értékes anyagok is. A találmány szerinti eljárást közelebbről az alábbi példák szemléltetik; megjegyzendő azonban, hogy a találmány köre nincsen ezekre a példákra korlátozva. A példákban a hőmérsékleti adatok Celsius-fokokban értendők. 1. példa: Rhi 12—648 antibiotikum Egy 10 literes f er men torba (New Brunswick Co., New Brunswick, USA, „F 314" típus) az alábbi összetételű tápoldatot visszük be: 2 g KH2 P0 4 2 g MgSC-4. 7H2 0 2 g. malátakivonat (Schweiz. Ferment A G. készítménye) 2 g peptön (Cudahay) 20 g „Cerelose" (Sandoz-készítmény) iontalanított vízzel 1,0 literre feltöltve; pH = kb. 5,6. Ezt a tápoldatot az 1440 jelzésű törzs kultúrájával beoltva, szellőzés (percenként 10 liter levegővel) mellett, 27 C° hőmérsékleten 120 óra hosszat inkubáltuk keverés (percenként 300 fordulattal) közben. Ezután az oldatot szirupszűrőn át leszűrtük, a tiszta szüredéket 8—8 liter etilacetáttal szobahőmérsékleten kétszer extraháltuk, az egyesített szerves fázisokat 5 liter desztillált vízzel mostuk és vízmentes nátriumszulfáton szárítottuk. Az oldószert vákuumban, 35° hőmérsékleten,, keringtető bepárlóban elpárologtatjuk és a kapott sárga maradékot 35-szörös 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4 '
