152890. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tisztított és kristályosított leuvin-amino-peptidáz előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés-napja: 1964. VIII. 28. (AE—178) Német Demokratikus Köztársaság-beli elsőbbsége: 1963, IX. 19. Közzététel napja: 1966. I. 22. Megjelent: 1966. VIII. 15. 152890 Szabadalmi osztály: 30 h 1—8 Nemzetközi osztály: A 61 k Decimal osztályozás: Feltalálók: Dr. Hanson Horst professzor és Dr. Glässer Dietmar, Halle, Német Demokratikus Köztársaság Tulajdonos: VBB Arzneimittelwerk Dresden cég, Radebeul, Német Demokratikus Köztársaság Eljárás tisztított és kristályosított leucin-amino-peptidáz előállítására 1 A találmány tárgya eljárás nagy tisztaságú tömény leucin-amino-peptidáz előállítására kristályos alakban. Ismeretes, hogy a leucin-amino-peptidáz fehérjehasító fermentum, amelyet a fehérje- 5 kutatás területén, így pl. peptidek és fehérjék szerkezetvizsgálatára, vagy szintetikusan előállított peptidek optikai tisztaságának vizsgálatára, valamint optikailag aktív aminosavak 'ipari előállítására is felhasználnák. io Az irodalomból •* ismeretesek olyan eljárások, amelyek segítségével eltérő tisztaságú leucin-amino-peptidázt lehet előállítani disznóveséből. Leucin-amino-peptidáznak marhaszemlencséből törtéhő kinyerésére két eljárás ismére- 15 tes. Ezek közül csupán az egyik egyszerű anynyira, hogy alkalmasnak látszik ipari felhasználásra. Az összes egyéb módszerek vagy nagyon munkaigényesek, bonyolultak és nehezen reprodukálhatók, vagy pedig csupán cse- 20 kély mennyiségben szolgáltatnak nagy tisztaságú készítményt. Az eddig ismert módszerek nem tették lehetővé kristályos leucin-amino-peptidáz előállítását, és alkalmazásukkal csupán Ci = 50—^60 25 nagyságú fajlagos , aktivitás-értékeket tudtak elérni. Ipari előállítás során az ismert eljárásokkal általában csak Ci =. _10, maximálisan . Ci + 25 értékék voltak elérhetők. Az így kapott leucin-amino-peptidáz azonban néni defi- 30 ni álható idegen proteinekkel, többek között enzimatikus idegen aktivitásokkal volt szenynyezve, ami a termék gyakorlati felhasznál-, hatóságát erősen korlátozta. A találmány célja olyan eljárás biztosítása, amelynek segítségével iparilag olcsón lehet nagy tisztaságú, tömény leucin-amino-peptidázt előállítani. A ' találmány értelmében először módosítjuk a nyers lencse-homogenizátum önmagában ismert cinkes kezelését, amelynek célja a leucin-amino-peptidáz előtisztítása marhaszemlencsékből történő kinyerés esetén. Egy ezután következő hőkezeléssel a fermentum olyan nagyfokú előtisztítását érjük el, hogy az a hőkezelt frakcióból már kikristályosítható. A találmány eljárás tisztított és kristályos leucin-amino-peptidáz kinyerésére marhaszeni- . lencséből, amely abban áll, hogy hőkezelés és ismert, módosított cink-kicsapás kombinációja útján nagy tisztaságú leucin-amino-peptidáz készítményt állítunk elő, amelyből a fermentumot ammóniumszulfát hozzáadása útján, vagy a pH-nak az izoelek^tromos pontfeoz való közelítése útján kikristályosítjuk. Ennek az eljárásnak az összes eddig ismert eljárással szemben az a lényeges előnye, hogy a fermentumot különösebb apparativ igény nélkül rövid időn belül kristályosíthatjuk, és ilyen módon nagyobb mennyiségekben is opti-X. 152890