152890. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tisztított és kristályosított leuvin-amino-peptidáz előállítására

152890 malis tisztasági Jókkal nyerhetjük ki. Ezáltal az előállítási költségek minimálisra csökkennek. A kristályos férmentum aktivitása mintegy húszszor nagyobb, mint a jelenleg rendelkezésre álló kereskedelmi készítményé. A . találmány szerinti eljárással előállított kristályos enzim Q-értékei 150 és 220 között mozognak; ilyen magas fajlagos aktivitások már lehetővé teszik a gyógyászati felhasználást, valamint a peptidek és tojásfehérjék szerkezetelemzésében történő alkalmazást is. Az alábbi táblázat az aktivitás növekedését, valamint az össz-nitrogén-tartalom és az idegen proteinek mennyiségének csökkenését mutatja a találmány szerinti eljárás esetében. I 1—1 es Frakció i "£ U Idegen protein LAP (csapadékban) Nyers homogenizátum 802,5 Cinkes hőkezelés után 7,93 Kristályosítás után 0,497 0,156 15,04 220 1200 : 1 10 : 1 0 : 1 A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példát adjuk meg. Lehetőleg fiatal (kb. 2 évnél nem idősebb) állatokból származó marhaszemlencséket 100 ml 0,9%-os NaCl-oldattal homogenizálunk. Ehhez a nyers homogenizátumhoz felváltva csepegtetünk óvatosan 1 mólos MnC^-oldatot és 1 mólos ZnS04

-oldatot mindaddig, amíg 5 el nem érjük a 0,005 mólos MnCVkoncentóciót, ill. a 0,006 mólos ZnS04-koncentrációt. Eközben 1 mól NaOH hozzáadása útján a pH-értéket 7,2 és 7,4_között tartjuk. A keletkező csapadékot lécentrifugáljuk és elöntjük. A 10 fennmaradó oldatot 12 percen át 54 C°-os vízfürdőben tartjuk, és az ekkor keletkező csapadékot szűréssel elkülönítjük. A szüredék már nagy tisztaságú leucin-amino-peptidáz készítményből aÜ. Minden 1 ml szüredékre számítva 15 0,35 g szilárd ammónium-szulfát hozzáadása után elkezdődik a kristályosodás, amely + 4 C°-on 1—2 napig tartó állás után befejeződik. Az elkülönített kristályokat 5,0—5,5 pH-jú desztillált vízzel moshatjuk. A pH-értéknek 20 8,0~ra való beállítása útján a kristályok oldatba ménnek. ' Szabadalmi igénypont: 25 Eljárás tisztított és kristályos leucin-amino-peptidáz kinyerésére marhaszemlencséből, amelyre jellemző, hogy hőkezelés és ismert, módosított cmk-kicsapás kombinációja ^ útján nagy tisztaságú leucinvamino-peptidáz készít-30 ményt állítunk elő, amelyből a fermentumot ammónium-szulfát hozzáadása útján, vagy a pH-nak az izoeléktromos ponthoz való közelítése útján kikristályosítjuk. A kiadásért felel: a közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 6607720. Zrínyi <T) Nyomda, Budapest, V.; Balassi Bálint utca 21—28 8»