152818. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fehérje tartalmú termékek előállítására mikroorganizmusok tenyésztése útján

152818 6 Szabad oxigént tartalmazó gáz jelenlétéről azonban minden . esetben gondoskodni kell. A Penicillium expansum szénhidrogéneket tartalmazó vizes tápközegben való tenyésztésre alkalmas, A Penicillium requeforti, Penicillium notatum, Aspergillus fussigatus, Aspergillus niger és Aspergillus versicolor szénhidrogéneket tartalmazó szilárd táptalajon tenyészthetők. A mikroorganizmusok tenyésztéséhez a széntartalmú nyersanyagokon kívül víztartalmú tápközegről és oxigénről (előnyösen levegő alakjában) is gondoskodni kell. A Nocardia (az Actinornicetales rendbe tartozó nem) tenyésztésére alkalmas táptalaj öszszetétele a következő lehet: ^ 10 15 ammóniumszulfát 1 g magnéziumszulfát 0,20 g vas(II)szulfát—7H2

0 0,005 g 20 mangánszulfát—H2

0 ' 0,002 g monokáliumfoszfát 2g diliátriumfoszfát 3 g kálciumklorid 0,1 g nátriumkarbonát 0,1 g 25 élesztőkivonat 0,008 g desztillált vízzel feltöltve 1000 ml-rg. -Másfajta baktériumok. tenyésztésére az alábbi összetételű táptalaj alkalmazható: . 30 monokáliumfoszfát 7 g . magnéziumszulfát—7H2

0 0,2 g nátriumklorid 0,1 g ammóniumklorid 2,5 g 35 vízvezetéki víz (nyomelemek) 100 ml élesztőkivonat ' 0,025 g desztillált vízzel feltöltve 100O ml-re. Az élesztők (és penészgombák) tenyésztésére 40 alkalmas tápközeg a következő összetételű lehet: diammóniumfoszfát 2 g káliumklorid 1,15 g *5 magnéziumszulfát—7H2

0 0,65 g cinkszulfát 0,17 g mangánszulfát—H2O 0,045 g vas(II) szulfát—7H2

0 0,068 g vízvezetéki víz 200 g 50 élesztőkivonat 0,025 g desztillált vízzel felt-öltve 1000 ml-re. A mikroorganizmusok, különösen az élesztők, a széntartalmú nyersanyagként felhasználásra 55 kerülő szénhidrogénfrakciók jelenlétében először történő tenyésztésük során olykor nehezen fejlődnek, és olykor szükséges lehet inokulumként oly mikroorganizmusokat alkalmazni, amelyeket előzőleg már adaptáltunk a felhasználandó szén- 80 hidrogénfrakciók jelenlétében való fejlődésre. Emellett a mikroorganizmusok, bár megfelelő tápelemeket tartalmazó vizes ásványi \özeg jelenlétében tenyésztjük őket, gyakran azért is nehezen fejlődnek, mert a felhasználásra kerülő 65 szénhidrogénfrakció nem tartalmaz olyan növekedési faktorokat, amelyek egyébként a szénhidrátalapú tápanyagokban jelen vannak, ezért célszerű lehet ilyen növekedési faktorokat hozzáadni a tápközeghez. Elősegíti a mikroorganizmusok fejlődését, ha a tápközeghez igen kis mennyiségű élesztőkivonatot (az élesztő hidrolízise útján nyert, B-cso^portbeli vitaminokban gazdag ipari termék) vagy általában B-csoportbeli vitaminokat és/ vagy biotint adunk. Ezek. mennyisége a vizes tápközegre számítva 25 ing/liter körül lehet. Alkalmazhatunk azonban ennél nagyobb vagy kisebb mennyiséget is, a fejlődés kívánt feltételeitől függően. A mikroorganizmusok fejlődésük során felhasználják a kiindulóanyagként alkalmazott szénhidrogénfrakciöt, miközben közbenső termékként savas csoportot tartalmazó vegyületek, főként zsírsavak képződnek oly módon, hogy a vizes ásványi tápközeg pH-értéke fokozatosan csökken. Ha nem gondoskodunk a kedvező pH-érték helyreállításáról, akkor a mikroorganizmusok fejlődése eléggé hamar megakad, és a sejtkoncentráció a tápközegben nem növekszik tovább, vagyis ún. stacioner fázis áll be a mikroorganizmus fejlődésében. Ezért előnyös a vizes tápközeget a kívánt pH-értéken tartani, valamely nagy pH-értékű vizes közeg adagonkinti vagy folytonos hozzáadása útján. Penészgombák vagy élesztők, különösen a Candida lipolytica mikroorganizmus alkalmazása esetén a pH-értéket általában 3 és 6 között, előnyösen 4 és 5 között tartjuk. .(Baktériumok esetében az előnyös pH-tartornány magasabb, rendszerint 6,5—8.). A tápközeghez való hozzáadásra alkalmas alkalikus anyagok példáiként nátriumhidroxid, káliumhidroxid, dinátriumhidrogénfoszfát és ammónia említhetők; ezeket szabad állapotban .vagy vizes oldatban adagolható juk a kultúrához. A mikroorganizmusok tenyésztésének legkedvezőbb hőmérséklete a mikroorganizmusok fajtájától függően változik, általában azonban 25— 35 C° lehet. Candida lipolytica alkalmazása esetén az előnyös hőmérséklettartomány 28 C° és 32 C° között van. / Az oxigénfelvétel lényeges a mkiroorganizmusok fejlődése szempontjából. Gyors fejlődés fenntartása érdekében az oxigént szolgáltató levegőt finom buborékok alakjában, keveréssel juttatjuk a tápközegbe. A levegőt _ zsugorított vagy egyéb pórusos felületen át vezethetjük be a tápközegbe. Kívánt esetben az ún. örvénylő szellőztetést is alkalmazhatjuk a levegővel való benső érintkeztetés biztosítására. Azt találtuk, hogy a Candida lipolytica élesztőtörzs és örvénylő szellőztetés alkalmazása esetén olyan gyors mikroorganizmusfejlődést érhetünk el, hogy a generációs idő kb. 2—5 óra, a sejtkoncentráció pedig 2 nap alatt tizenkétszeresére is növekszik. Szakaszos fermentáció esetén a mikroorganizmusok kezdetben általában lassan fejlődnek a sejtkoncentráció- növekedése szempontjából (a 3