152803. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy eddig ismeretlen polipeptid előállítására

152803 It) 20 még nem voltaik ismeretesek — a peptidkémiában szokásos általános módszerek szerint állíthatók elő, aminek során az egyes aminosavakat egyenként vagy kisebb peptid-egységék előzetes kialakítása után kapcsolhatjuk egymással. A találmány szerinti eljárás termékét képező új tetrakozapeptid sói alakjában is előállítható, ill. felhasználható. Sokként a szerves savakkal, mint ecetsavval, propionsavval, glikolsavval, tejsavval, piroszőlősawal, malonsawal, borostyánkősavval, maleinsavval, fumársavval, borkősavval, citromsavval, benzoesawal, fahéjsavval, szalicilsavval, 2-fenoxibenzoesavval, 2-acetoxibenzoesawal, mandulasavval, rnetánszulfonsawal, etánszulfonsavval, hi dr oxietánszulfonsawal, benzolszulf onsavval, toluolszulfonsavval, naftalinszulfansawal, szulfanilsavval, továbbá polimérsavakkal, mint csersawal, alginsavval, poligalakturansavvai vagy karboximetilcellulózzal, vagy pedig szervetlen savakkal, mint íhalogénhidrogénsavakkal, pl. sósavval vagy brómihidrogénsavval, salétromsavval, tiociánsavval, kénsavval vagy faszforsawal képezett sók jöhetnek tekintetbe. 25 A találmány szerinti eljárással előállítható tetrakozapeptid és ennek sói ugyanolyan biológiai és gyógyászati tulajdonságokat mutatnak, mint a természetes kortikotropin (ACTH). így e vegyületek pl. az ízületi reumatizmus, 30 asthma bronchiale, arthritis, allergiás megbetegedések, köszvény, urticaria, anafilaxiás sokk, colitis ulcerosa, lupus erythematodes, égési se- . bek, dermatitis exfoliativa, lymphatikus leukémia, szklerodermia, ekcéma, idült alkoholiz- 3g mussal járó intoxiíkációs állapotok gyógykezelésére, valamiint a mellék vesekéreg kortizonszármazékokikal való kezelés esetén fellépő atrophiájának megelőzésére alkalmazhatók. Az új > tetrakozapeptid a Sayer-féle módszerrel mérve ugyanolyan fokú hatásosságot mutat, mint a természetes kortikatropin. Míg a természetes kortikotropin csak fáradságos és költséges módszerekkel tisztítható és gyakorlatilag még mindig tartalmiaz nagymolekulájú "fehérjeszerű szennyezéseket, amelyek veszedelmes anaphylaxiás reakciókat válthatnak ki, addig az új szintetikus vegyület közvetlenül nagy tisztasági fokban és mindenfajta fdhérjeiszerű szennyezéstől mentesen ál- 50 Irtható elő. Ezenkívül az új szintetikus tetrakozapeptid előállítása független az agyalapi mirigyek beszerezihetőségétő!; e szervek ugyanis mindig csak korlátozott mennyiségben állnak rendelkezésre és igen költségesek. A találmány szerinti eljárás különös előnye, hogy az eljárás termiékeként nyert új tetrakozapeptid a 4-ihelyzetiben nem tartalmaz metionin-maradékot, mint a már ismert L-szeril--L-tirozil-L-szeril-iL-metionil-L-glutamil-LJhisztidil-L-fenilalanil-L-airginil-L-triptofanil-glicil-L4izil-L-prolil-L-valil-glicil-L-lizil-L-lizil-L-arginil-L-a:rginil-L-prolil-L-valil-L-tirozil-L-prolin és a természetes ACTH; a metionin-maradék ugyanis ismeretes módon gg 40 45 55 60 könnyen oxidálódik és az ilyen oxidáció következtében az egész termék inaktív alakba megy át. A találmány szerinti új vegyület e helyen norleucm^maradékot tartalmaz, amely ugyanolyan sztérjkus - tulajdonságokat mutat, mint a metionin-imaradék, ezzel szemben oxidatív behatásokkal szemben állandó. A találmány szerint előállítható új vegyülel a természetes ACTHJhoz hasonlóan depothatású készítmény alakjában is alkalmazható, pl. zselatinnal, karbometoxicellulózzal, poligalakturonsawal vagy más, savas csoportokat tartalmazó polimer anyaggal kombináltan. A találmány szerinti' eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik. E példákban az alábbi rövidítéseket alkalmazzuk: GBO karbobenzoxi Tri tirtil = trifenilmetil (For) formil (a lizin epszilon-aminocsoport Jan) (Tos) tozil = p-toluolszulfonil (az arginin guanido-csoportján) OCP 2,4,5-triklórfenoxi OTB terc.butiloxi Arg L-arginil Glu L-glutamil Gly glicil His L-ihisztidil Lys L-lizil Nie L-norteucil Ehe L-fenilalanil Pro L-prölil ' Ser L-szeril Try L-triptofanil Tyr L-tirozü Val L-valil Leu L-leUcil Ala L-alanil ; 1. példa: (A leírt eljárást vázlatosan az e leíráshoz csatolt táblázatos reakció-vázlat szemlélteti.) a) H-Val-Gly-(Por)Lys-(For)iLys-Arg-Arg- --Pro-OH 12 g CBO-Val-Gly-(For)Lys-(For)iLys-(Tos) Arg-(Tos)-A;rg-Pro-OH 5 liter szárított cseppfolyós ammóniával 'készített oldatához élénk keverés közben fém-nátriuimdarafbokat adunk állandó mélykék színeződés fellépésiéiig. Azután 2 g ammóniumkloridot adunk a realkcióelegybez, az ammóniát elpárologtatjuk, a maradékot nagyvákuumban szárítjuk és 250 ml 0,2 n ecetsavoldatlban oldjuk. A szervetlen sókat Dixon [Biochem.Biophys, Acta, 34, 251 (1959)] módszere szerint eltávolítjuk, a sóktól mentesített oldatot bepároljuk, a maradékot metanolban oldjuk és etiléter hozzáadásával lecsapjuk. Az így kapott termék H-Val-Gly-(For) Lys-(For)iLysHArg-Arg-Pro-OH-acetát. [a]22

p = —40° (n-eeetsaVöldatíban). 2