152551. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új polipeptid és e polipeptidet tartalmazó kombinált gyógyszerkészítmények előállítására

s 152551 6 1.. példa: a) N-alfa-karbobenzoxi-N-delta-p'-toIuolszulfonil-L-omitil-glicin-etileszter. 104 g N-alfa-karbobenzoxi-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitint és 27 g glicin-etilésztert 450 ml acetonitrilben oldunk, az oldatot 0° hőmérsékletre hűtjük le, 51 g diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá és az elegyet 4 óra hosszat rázzuk szobahőmérsékleten. A levált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és acetonitrillel utánamossuk. Az egyesített szüredéket vákuumban bepároljuk. A maradék petroléter hozzáadása után kikristályosodik. A termék n-propanolból történő átkristályosítáaa után 136°-on olvadó N-alfa-karbobenzoxi-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicin-etilésztert kapunk; (a)2aD

= „

7

° (960/

0

_os etanolban). b) N-karbobenzoxi-L-prolil-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicin-amid. 90 g N-alfa-karbobenzoxi-N-delta-p-toluolszulfönil-L-ornitil-glicin-etilésztert 800 ml brómhidrogénsavval telített vízmentes ecetsavban oldunk. Az oldatot 1 óra hosszat hagyjuk állni 20° hőmérsékleten, majd vákuumban, 40° alatti hőmérsékleten bepároljuk és a maradékot dietiléterrel gondosan utánamossuk, A maradékot ezután 500 ml acetonitrilben oldjuk, 25 ml trietilamint és 43 g N-karbobenzoxi-L-prolint adunk az oldathoz;, 0° hőmérsékletre hűtjük, 35,5 g diciklohexil-Jkarbodiimidet adunk hozzá és éjjelen át 20° hőmérsékleten rázzuk. A diciklohexil-karbamid kiszűrése után a szüredéket vákuumban, 30° hőmérsékleten bepároljuk, a maradékot etilacetátban oldjuk és ezt az; oldatot előbb híg kénsavval, majd vizes ammóniumhidroxiddal mossuk. Vízmentes nátriumszulfáton történő szárítás után az etilacetátot vákuumban elpárologtatjuk és a maradékot 1 liter absz. etanolban oldjuk. Az oldatot 0° hőmérsékletre hűtjük, ammóniával telítjük és éjjelen át 20° hőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután vákuumban, 30° hőmérsékleten bepároljuk az elegyet, a maradékot 100 ml dimetilformamidban oldjuk és 1500 ml etilacetát hozzáadása után kristályosítjuk a terméket. Ily módon N-karbobenzoxi-L-prolil-N-delta-p-toluolszulfonil-L-oirnitil-glicinamidot kapunk, amely 122°-on bomlás közben olvad; (a)22

o = —46°(95%-os jégecetben). c) N-karbobenzoxi-L-glutaminil-L-taszparaginül-S-benzil-L-ciszteinil-L-prolil-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicinarnid. 100 g N-karbobenzoxi-L-prolil-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicinamidot 500 ml brómhidrogénnel telített vízmentes ecetsavban oldunk, az oldatot 1 óra hosszat 20° hőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuumban, 40° alatti hőmérsékleten bepároljuk. A maradékot dietiléterrel gondosan mossuk, majd hozzáadjuk 100 g N-kárboberizoxi-L-glutaininil-L-aszparaginil-S-benzü-L-ciszteinil-azid (vö. Boissonnas és mtsai, Helv. chim. Acta, 38, 1491, 1955.) és 26 ml trietilamin 1000 ml dimetilformamiddal ké-5 szített oldatához. Az elegyet éjjelen át 20° hőmérsékleten állni hagyjuk, majd 3000 ml etilacetátot adunk hozzá, a csapadékot leszűrjük és etilacetáttal mossuk. Ily módon N-karbobenzoxi-L-glutaminil-L-aszparaginil-S-benzil-L-cisiz^ 10 teinil-L-prolil-N-delta-p^toluolszulfonil-L-onnitil-glicinamidot kapunk, amely 188°-on bomlás közben olvad; (a)20

D

= —33° (dimetilformamidban). 15 d) N-karbobenzoxi-S-benzil-L-diszteinil-L-fenilalanil-L-izoleucil-L-glutaminil-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil-L-prolil-N-dielta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicinamid. 20 50 g N-karbobenzoxi-L-glutaminil-L-aszparaginü-S-benzil-L-ciszteinil-L-prolil-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicinamidot 250 ml brómhidrogénsavval telített vízmentes ecetsavban oldunk és az oldatot 1 óra hosszat hagyjuk 25 állni 20° hőmérsékleten. Az oldószert ezután vákuumban, 40° alatti hőmérsékleten elpárologtatjuk, a maradékot dietiléterrel gondosan mossuk, majd 31,1 g N-karbob enzoxi-S-benzil~L-ciszteinil-L-fenilalanil-L-izoleucil-azid és 7,5 ml 30 trietilamin 250 ml dimetilformamiddal készített oldatát adjuk hozzá. Az elegyet 2 napig hagyjuk állni 20° hőmérsékleten, majd 1000 ml etilacetátot adunk hozzá, a képződött csapadékot elkülönítjük és etilacetáttal mossuk. A termé-35 ket vákuumban, 30° hőmérsékleten szárítjuk, majd meleg metanollal mossuk. Ily módon N-karbobenzoxi-S-benzil-L-ciszteinil-L-fenilalanil-Lf-izoleucil-L-glutaminil-L-aszparaginil-S-benzil-L^cisz;teinil-L-prolil-N-delta-p-toluolszulfonil-L-40 -ornitil-glicinamidot kapunk, amely 242°-on olvad; (&)21D

=

—40° (dimetilformamidban). e) L-ciszteinil-L-fenilalanil-L-izoleucil-L-glutaminil-L-aszparaginil-L-ciszteinil-L-prolil-;L-45 -ornitil-glicinamid. 5 g N-karbobenzoxi-S-benzil-L-ciszteinil-L-fenilalanil-L-izchleucil-L-glutaminil-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil-L-prolil-N-delta-p^toluol-50 szulfonil-L-ornitil-glicinamid 1200 ml száraz cseppfolyós ammóniával készített oldatához keverés közben, az oldat forrpontjának megfelelő hőmérsékleten, annyi fém-nátriumot vagy -káliumot adunk, míg állandó kék színeződés 55 nem lép fel. 3 g ammóniumklorid hozzáadása után az oldatot szárazra pároljuk be. A maradék tartalmazza az L-eiszteinil-L-fenilalanil-L-izoleucil^L-glutaminil-L-aszparaginil-L-ciszteinil-L-prolil-L-ornitil-glicinamidot. 60 f) Phe

ä-Orn

8

-oxitocin. A fentiek során kapott maradékot, amely az L-ciszteinil-L-f enilal anil-L-izoleucil-L-glutami-65 nil-L-aszparaginil-L-ciszteinil-Li-prolil-L-ornitil-3