152293. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tartósított trombocita szuszpenziók előállítására
152293 izotópos vizsgálatoklkai tudták egyes esetekben a trombociták túlélését bizonyítani. (Cohen P. and Gardner F. H.: Platelet, preservation J. Clin. Invest. 41, 1—19 1962.) A találmány szerint tartósított és infundálható trombocita szuszpenziók előállítására friss, csoportazonos EDTA antiikoagulánssal kezelt vérből indulunk ki, melyet először ismert módon kíméletes centrifugálásnak, majd pedig a centrifugálás során nyert felüluszó trombocitadús fázis leszivatása után, azt nagy fordulatszámú centrifugán ülepítjük. A találmány szerinti módszerre az; jellemző, hogy az ülepített tromlbocitákat fiziológiás konyhasóoldattal plazmamentesre mossuk, a plazmamentesre mosott trombocitákat Nipagin M, vagy Nipagin M ós Nipasol 7 :3 arányú keverékének 0,75—'2%o-es '.(célszerűen l°/oo-es) fiziológiás konyhasóoldattal készített oldatában szuszpendáljuk oly módon, hogy a kész szuszipenzió 2—S millió/mm3 sejtszámot tartalmazzon, az így tartósított készítményt +1 — +5 C°-on felhasználásig tároljuk. A felhasználás során a szuszpenziót eredeti állapotában AHF lioplazmálban, célszerűen pedig kétszeresére koncentrált AHF lioplazmában reszuszpendáljuk és a reszuszpendálást követő négy órán belül infundáljuk. A találmány szerinti eljárással kezelt trombociták a tárolást követő egy éven belül friss plazmában reszuszpendálva megtartják, eredeti tulajdonságaikat és a friss trombocita. szuszpenziónak megfelelő trombocita faktor aktivitást mutatnak. Azt is .sikerült elérni, hogy a trombociták alvadástani szempontból legdöntőbb faktora, a 3. faktor sem veszít a tárolás alatt aktivitásából, tehát speciális esetekben (3, faktor hiánya vagy csökkent aktivitása) az elkészült szuszpenzió még reszuszpendálás nélkül is alkalmazhatóvá válik. .A trombocita szuszpenziók tartósítására alkalmazott ÍNipagin M-t, vagyis p-oxibenzoesav-metilésztert és a ÜNTipasolt, vagyis p-oxibenzoesav-propilésztert, a gyógyászatban eddigiekben gyógyszer készítmények konzerválására és injekciós készítmények .sterilen való tartására használták. A találmány szerinti tartósítási módszer az élősejtek tárolásának eddig teljesen ismeretlen módszere, ugyanis, a Nipagin-M— Nipasol oldata az élősejtek anyagcseréjére olyan hatással van, melyben a hibernáláshoz hasonlóan az anyagcsere folyamatok minimálisra korlátozódnak, azonban, fiziológiás környezetben rövid időn belül újból eredeti funkciójuk kifejtésére késztethetők. A találmány újszerűsége a továbbiakban tartósított élősejtek friss plazmában való reszuszpendálásábani is rejlik, melyet az ismert eljárásokban egyes vizsgálatok szempontjából ugyan alkalmaztak, azonban a tartósított élősejtek újrafelélesztése mint módszer nem, vált ismeretessé. Annak bizonyítására, hogy a gyógyászatban alkalmazott bakteriosztatikus anyagok közül a találmány szerint felderített tartósítószer specifikus, vagyis a toomíbociták funkcionális képességét csak ez nem zavarja, iaz alábbi kísérletsorozatot végeztük el: 110 napos tárolási idő alatt az alábbi tartósítószerek trornbocita szuszpenziókra gyakorolt 5 hatását vizsgáltuk meg: l,5%o Nipagin-M 1 csepp oktilalkohol/7 ml fizialógiás^konyhasós szuszpenzió 10 l%o fenol l%o Solutio Conservans A trombocita szuszpenziokra, gyakorolt hatás tekintetében a trombocita 1—2 faktor, a 3 15 faktor és a trombocita szám változását figyeltük meg. A kapott eredményeket a, csatolt ábrán, tüntetjük fel. Az ábra A grafikonján a trombocita, 3 faktor alvadási idejét TGT '(Thromboplastin generation test) rendszerben, 20 a B grafikonion. a trombocita 2 faktor alvadási idejét, a C grafikonon az 1—2 faktor komplex alvadási idejét másodpercekben, ill. a D grafikonon az 1000 aktív tromiboeita/mm3 értéket szemléltetjük. A grafikonok abszcisszáin a na-25 pok számát, míg az ordinátán az alvadási időket másodpercben, ill. a D grafikonon az ezerszeres trombocita/mm3 számértéket szemléltetjük. A grafikonon vastagabban meghúzott öszrszefüggő vonalú görbe l,5%o Nipagin-M, szag-30 gatott vonallal meghúzott görbe az 1 csepp oktilalkohol/7 ml szuszpenzió, a vonal-pont görbe l%o fenol, a pontozott görbe 1 Solutio Gonservans tartósító szerékikel kezelt trombocita szuszpenziók vizsgálati eredményeit tün-35 téti fél. A görbék adatai alapján, a trombocita szám és a trombocita funkció változásait vizsgálva megállapítható, hogy a találmány szerinti tartósítási mód bizonyul a legmegfelelőbbnek, az 40 eddig ismertekhez képes ugyanis az ily módon tárolt trombociták 3 faktor aktivitása a kiindulási értékhez viszonyítva alig változott, míg a csökkent 1—2. faktorok aktivitása a trombociták friss plazmában való reszuszpendálása 45 után ismét megközelítette az eredeti aktivitási értéket. A kísérletek során az is kiderült, hogy a kétszeresére koncentrált AHF (antihaemophiliás) plazma a 2. és 3. trombocita faktorok aktivitását mintegy 10%-kal emeli és kissé 50 sietteti, ezért a reszuszpendálásra használt lioplazmát ennek megfelelően oldottuk fel ós alkalmaztuk a tartósított trombocita szuszpenziók reszuszpendálására. A koncentrált plazma alkalmazása mellett szóltak a továbbiakban a 55 volumetriás retraikciós vizsgálatok is. A találmány szerinti trombocita tartósítás során mind a Nipagin-M önmagában, mind pedig a Nipagin-M—(Nipasol kombináció bevált. Ha azonban figyelembe vesszük azt, hogy 60 a Nipagin-M fungicid tulajdonsága mellett a Nipasol baktericid hatást is kifejt, akkor előnyösebbnék látszik a felsorolt tartósítószereket a kísérletek során jól bevált 7 : 3 Nipagin-M : Nipasol Összetételben, fiziológiás konyhasó ol-65 dathan l%0 -es koncentrációban felhasználni. I
