152293. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tartósított trombocita szuszpenziók előállítására
152293 6 A találmány szerinti eljárás gyakorlati kivitelezése során a következőképpen járunk el: 2X360 ml friss: vérből indulunk ki, melyet 40 ml 1%-os EDTA-t fetiléndiamintetraacetát) tartalmazó szilikonozott palackba vesszük le, 5 majd kíméletes centrifugálással t(10 percig 900—1000 perc/fordulatszámmal) a plazmát a vörösvérsejtektől elkülönítjük. Az elkülönített tromibocita plazmát szilikonozott edényekbe visszük át, ezután kétízben fiziológiás konyha- 10 sóoldattal centrifugán (3000 ford/perc, 20 perc) plazmamentesre mossuk, vtégül 10 ml l%o-es fiziológiás konyhasós Nipagin-M—Nipasol 7 : 3 arányú oldatban szuszpendáljuk a trombocitákat. Az infundálható és tartósított trombocita 15 szuszpenzióhoz szükséges, aintikoagulánsként használt EDTA, valamint az alkalmazott tartósítószer oldata pirogénmentesek. A szuszpenzió az állatkísérletek során az ártalmatlansági próbának, valamint a sterilitási feltételeknek 20 megfelel. Ha a szuszpenziót kétszeresére koncentrált AHF plazmában reszuszpendáljuk, annak fehérje gramm%-ában változást nem okoz, A továbbiakban azt vizsgáltuk meg, hogy a tárolás hőmérséklete milyen hatással van a 25 trombocita szuszpenziók aktivitására, ill. adszorbeáló képességére. A reszuszpendálás során ugyanis a troimbociták, melyek a tartósítással adszorpció képességüket fenntartják, az alkalmazott friiss plazmából képesek az egyes plaz- 30 mafaktorokat adszorbeálni, ezáltal pedig eredeti aktivitásukat visszanyerik. 21 napig tartó tartósítási kísérletek során a találmány szerinti eljárással készített és alábbi három, 'módon kezelt és tárolt trombocitákat 35 vizsgáltuk: a) 36 óra hosszat 37 C°-an való inkubálás után +4 C°-on tárolva, ib) szobahőmérsékleten tárolva, c) +4 C°-on tárolva. 40 A tárolási kísérletek során azt tapasztaltuk, hogy a trombociták 1—2. faktor komplex aktivitása inkubálás vagy szobahőmérsékleten való tárolás után lényegesen csökken, míg a 4 C°-on tárolt szuszpenzió még 14 nap eltelte 45 után is 8% aktivitással rendelkezik, reszuszpendálás után pedig az előbbihez képest lényegesen hamarabb éri el a, már megfelelő 70—80%-os aktivitást. A trombocita 2 faktor esetében a +4 C°-on tárolt; anyag adja a legmegfelelőbb értéket és ugyanez vonatkozik a trombocita 3 faktor aktivitásra is. A thrombelasztografiás vizsgálatok bebizonyították a trombociták regenerálódását, ennek alapján pedig a találmány szerinti készítmény kedvező felhasználhatóságát. A találmány szerint tehát hosszú ideig tárolható, a beadás előtt közvetlenül AHF lioplazmában reszuszpendálható tromlbocita szuszpenziót nyerhetünk, ha a találmány szerint készített trombocita szuszpenziót +4 C° tárolás után a mindenkor készen tárolható AHIF plazmában reszuszpendáljuk. Szabadalmi igénypont: Eljárás tartósított és infúziós célokra alkalmas trombocita szuszpenzió előállítására friss vérből, az antikoagulánssal kezelt csoportazonos vér ismert módon való kíméletes oentrifugálása és a centrifugálás során nyert félüluszó trombocitadús fázis leszivatása és centrifugán való ülepítése útján, azzal jellemezve, hogy az elkülönített trombocitákat fiziológiás, konyhasóoldattal plazmamentesre mossuk, majd 0,75—2%o, célszerűen 1 koncentrációjú fiziológiás konyhasóoldatban oldott p-oxibenzoesav-metilészter !(tNipagin-M), vagy p-oxibenzoesav-metilészter és p-oxibenzoesav-propilészter (Nipasol) 7 :3 arányú keverékének ugyancsák, 0,75—2%o-es, célszerűen 1%-es fiziológiás konyhasós oldatában szuszpendáljuk oly módon, hogy a kész szuszpenzió 2—5,000.000/mm3 sejtet tartalmazzon, majd az így elkészült szuszpenziót + 1 — +5 C° között felihasználásig tároljuk, végül felhasználás előtt 4'—6 órával a tárolt szuszpenziót friss csoportazonos, plazmában vagy előnyösen kétszeresére koncentrált AHF lioplazmában reszuszpendáljuk. 2 db rajz A kiadásért felel: a közgazdasági és Jogi könyvkiadó igazgatója 658084. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23.
