152069. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív oligopeptidek előállítására
9 hidrazinolizisével állítjuk elő. A tripeptidésztert •a-/. N-terminális dipeptid (XIV) és L-szerin-metilészter (XXII) kondenzációjával készítjük. Az így előállított nonapeptidet az előzőkben megadott módon alakítjuk tovább. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 1. példa (lásd az 1. táblázatot): Z-Ile-Gly-OEt (III) előállítása. a) Vegyes savanhidrid módszerrel: 150 ml kloroformban feloldunk 30 g (113 mmól) karbobenzoxi-L-izoleucint, és 15,75 ml (113 mmól) trietilamin hozzáadása, után —10 C°-ra hűtve, 11,3 ml (kb. 113 mmól) klórszénsav-etilésztert csepegtetünk az oldathoz. Tíz perc keverés után 17,4 ml (125 mmól) trietilamint tartalmazó 200 ml kloroformban oldott 17,4 g (125 mmól) glicm-etilészter-klórhidrátot adunk a vegyes savanhidridhez. Éjszakai állás után egymást követően híg sósav oldattal, vízzel nátriumhidrogénkarbonát oldattal, majd vízzel mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A kristályos maradékot etanolban átkristályosítjuk. 31,0 g (78%) védett dipeptid-észtert (III) kapunk. Op.: 160—161 C°, («)D=— 26,6° (c=l, ecetsavban. b) Aktív észter módszerrel: 100 ml piridinben feloldunk 23,5 g (61 mmól) karbobenzoxi-L-izoleucm-p-nitro-fenilésztert (II) és 9,4 g (67 mmól) glicin-etil-észter-klórhidrátot (I), majd 9,4 ml (67 mmól) trietilamint adva az oldathoz, szobahőmérsékleten állni hagyjuk éjszakán át. Vízzel hígítjuk, eldörzsöljük, szűrjük, majd vízzel mossuk. Szárítás után 17,0 g (80%) védett dipeptid-észtert (III) kapunk. Op.: 160—161 C°. Analízis: C18 H 26 0 5 N 2 (350,40); számított: C 61,7, H 7,5, N 8,0; talált: C 62,0, H 7,7, N 8,0. Z-Phe-Ile-Gly-OEt (V) előállítása. 250 ml etanolban, mely 10 ml 5 n sósavat is tartalmaz, szuszpendálunk 17,5 g (50 mmól) védett dipeptid-észtert (III), és csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogén felvétele után a katalizátort kiszűrjük, és az oldatot bepároljuk. A kristályos maradék a dipeptid-észter klórhidrátja (Illa). Ezt az anyagot 21,0 g (50 mmól) karbobenzoxi-L-fenilalanin-p-nitro-fenilészterrel együtt (IV) feloldjuk 50 ml piridinben, és 7,0 ml (50 mmól) trietilamint adunk hozzá. Éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd vízzel hígítva eldörzsöljük, szűrjük, vízzel mossuk, és metanolból átkristályosítjuk. 20,6 g (83%) védett tripeptid-észtert (V) kapunk. Op.: 180— 181 C°, (a) f" =—30,1 (c=l, metanolban). Analízis: C27 H 35 0 6 N 3 (497,57); számított: C 65,30, H 7,10, N 8,45; talált: C 65,05, H 7,25, N 8,35. 10 Z-AIa-Phe-Ile-Gly-OEt (VII) előállítása. 25 g (50 mmól) védett tripeptidésztert (V) szuszpendálunk 300 ml etanolban, majd 10 ml 5 5 n sósav hozzáadása után az előbbi módon hidrogenolizáljuk. A hidrogén felvétele után a katalizátort kiszűrjük, és az oldatot bepároljuk. A nyert kristályos maradék tripeptid-észter-klórhidrát (Va). Ezt az anyagot 17,7 g (50 10 mmól) karbobenzoxi-L-alanin-p-nitro-fenilészterrel együtt feloldjuk 50 ml piridinben, majd hozzáadunk 7,0 ml (50 mmól) trietilamint, és éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Vízzel hígítjuk, eldörzsöljük, szűrjük, vízzel 15 mossuk, és etanolból átkristályosítjuk. 26,0 g (92%) védett tetrapeptid-észtert (VII) kapunk. Op.: 226—227 C°, (a) f,° = — 30,4 (c = l, ecetsavban). 20 Analízis: C,„H4 <AN 4 (568,65); számított: C 63,4, H 7,1, N 9,85; talált: C 63,6, H 7,3, N 9,95. Z-Ala-Phe-Ile-Gly-OH (Vila) előállítása. 25 A fenti védett tetrapeptid-észterből (VII) 17,0 g-ot (30 mmól) feloldunk 300 ml dioxán és 300 ml metanol elegyében, majd 30 ml 2 n nátrium-hidroxidot adva hozzá, két órán át 30 szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután 60 ml 1 n sósavval semlegesítjük, majd bepároljuk. A kristályos maradékot vízzel hígítva szűrjük, majd mossuk és szárítjuk. 13,5 g (90%) védett tetrapeptidet (Vila) kapunk. Op.: 210— 35 212 C°, (<*)«= — 39,5 (c = 1, ecetsavban). Analízis: C28 H 36 0 7 N 4 (540,60); számított: C 62,2, H 6,7, N 10,35; talált: C 62,6, H 6,8, N 10,25. 40 H-Ala-Phe-Ile-Gly-OH (Vllb ) előállítása. I A fenti védett tetrapeptidból (Vila) 13,5 g-ot (25 mmól) dekarbobenzoxilezünk 20,0 ml jég-45 ecetes brómhidrogénnel. Két órán át szobahőmérsékleten rázogatjuk, majd a pezsgés megszűnte után bepároljuk, 100 ml etanol és 100 ml kloroform elegyében oldjuk, és piridinnel semlegesítjük. A kivált kristályokat hűtés után 50 szűrjük, kloroformmal mossuk, majd megszárítjuk, 8,9 g (80%) tetrapeptidet kapunk (Vllb). Op. 250 C°, («)n=0 (c=l, ecetsavban). Analízis:. C20 H 30 O 5 N 4 • 2 H 2 0 (442,50); 55 számított: C 54,3, H 7,7, N 12,65; talált: C 54,8, H 7,5, N 12,70. Z-AspíOBuO-Ala-Phe-Ile-Gly-OH (IX) előállítása. 80 Karbobenzoxi-L-aszparaginsav^-terc.butil-«!-p-nitro-fenilészterből (VIII) 4,9 g-ot (11 mmól) feloldunk 40 ml piridinben, és 4,42 g (10 mmól) tetrapeptidet (Vllb), valamint 1,4 ml (10 mmül) 65 trietilamint adva hozzá, 48. órán át keverjük 5.
