152069. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív oligopeptidek előállítására
152069 11 12 szobahőmérsékleten. A kapott oldatot bepároljuk, majd 1 n citromsav oldattal eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. A száraz anyagot éterrel mossuk és ismét szárítjuk. 6,3 g (89%) védett pentapeptid-észtert kapunk. Op.: 227—228 C°. (a)o =—19 (c=l, ecetsavban). Rf-érték szilikagélen vékony rétegkromatografiával, kloroform — etanol — 25%-os vizes ammónia — víz 42 : 45 : 3 :1,0 rendszerben: 0,65, trifluorecetsavval szappanosítva: 0,48. Analízis: C36 H 49 O 10 N 5 (711,79); számított: C 60,9, H 6,9, N 9,9; talált: C 60,7, H 7,0, N 9,8. Z-Lys(BOC)-Asp(OBu')-Ala-Phe-Ile-Gly-OH (IX) előállítása. Kétszáz ml 80%-os ecetsavban feloldunk 5,0 g (7,0 mmól) védett pentapeptidet (IX), és hidrogenolízissel dekarbobenzoxilezzük. 3,65 g (90%) szabad pentapeptidet kapunk (IXa). Rf: 0,44; trifluorecetsavval szappanosítva: 0,13. Harminc ml dimetilformamid és 15,0 ml piridin elegyében feloldunk 3,6 g (7,2 mmól) a-karbobenzoxi-s-terc.butiloxi-karbonil-l-lizin-p-nitro-fenilésztert (X), továbbá a fent előállított szabad pentapeptidből (IXa) 3,17 g-ot (5,5 mmól), majd hozzáadunk 0,77 ml (5,5 mmól) trietilamint. A reakcióelegyet 48 órán át keverjük, majd a kapott oldatot bepároljuk, 1 n citromsav oldattal eldörzsöljük, szűrjük, citromsav oldattal és vízzel mossuk, majd szárítjuk. A száraz anyagot éterrel eldörzsölve mossuk, ezután ismét szárítjuk. Végül 3,9 g (75%) védett hexapeptidet (XI) kapunk. Op.: 212— 221 C°, («)£,%=—23 (c = l, ecetsavban). Rf: 0,67. Analízis: C47 H 69 0 13 N 7 (940,08); számított: C 60,0, H 7,4, N 10,4; talált: C 59,8, H 7,6, N 10,6. Z-Ser-Lys(BOC-Asp(OBu')-Ala-Phe-Ile-Gly-OH (XIII) előállítása. A fenti védett hexapeptidből 3,3 g-ot (3,5 mmól) feloldunk 200 ml 80%-os ecetsavban, majd hidrogenolizáljuk. A párlási maradékot éterrel eldörzsölve és szárítva 2,8 g (100%) szabad hexapeptidet kapunk. Op.: 231—232 C°. Rf: 0,54. 0,38 g (1,5 mmól) karbobenzoxi-L-szerin-hidrazidot 4,0 ml dimetilformamidban szuszpendálunk, és •—10 C° alatti hőmérsékleten 0,75 ml 6 n sósavat adunk hozzá. A hidrazid feloldódása után az oldathoz 0,135 ml 5 mólos nátrium-nitrít oldatot csepegtetünk, majd 15 percig —10 C°-on kevertetjük. 4,0 ml dimetilformamid és 8,0 ml piridin elegyében szuszpendálunk 0,81 g (1,0 mmól) fentebb előállított szabad hexapeptidet (Xla), és hozzáadunk 0,77 ml (5,5 mmól) trieti'lamint. A fenti módon készített azid oldatot hozzácsepegtetjük az így nyert szuszpenzióhoz. Az azidot —10 C° alatti hőmérsékleten, állandó keverés mellett adagoljuk. A reakcióelegyet egy napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd bepároljuk, 1 n citromsav oldattal eldörzsöljük, szűrjük, citromsav oldattal mossuk, szárítjuk, éterrel is mossuk, és ismét szárítjuk. 0,9 g (88%) védett heptapeptidet (XIII) kapunk. Op.: 206—207 C°, («) « = —26,0° (c=l, ecetsavban). Rf: 0,65. Analízis: C50 H 74 O I5 N 8 (1027,16); számított: C 58,4, H 7,25, N 10,9; talált: C 58,4, H 7,15, N 10,7. Z-Pyr-Pro-ONP (XlVa) előállítása. A karbobenzoxi-L-piroglutamil-L-prolinból (XIV) 3,8 g-ot (10,55 mmól) feloldunk 10 ml piridinben, és 3,75 g (11,6 mmól) bisz-p-nitro-fenilszulfitot adunk hozzá. Szobahőmérsékleten egy éjszakán át állni hagyjuk, bepároljuk, majd vízzel eldörzsöljük, szűrjük, nátrium-karbonát oldattal és vízzel mossuk, majd szárítjuk. A nyers terméket aceton-éter elegyből átkristályosítjuk. 4,06 g (80%) védett dipeptid-észtert kapunk. Op.: 141—142 C°. Analízis: C24 H 23 0 8 N4 (481,45); számított: C 59,5, H 4,75, N 8,7; talált: C 59,6, H 4,80, N.8,7. Z-Pyr-Pro-Ser-Lys(BOC)-Asp(OBu<)-Ala-Phe-Ile-Gly-OH (XV) előállítása. Az előző esetekben leírt módon 30 ml jégecetben dekarbobenzoxilezünk 0,52 g (0,5 mmól) védett heptapeptidet (XIII). A reakció végén a katalizátor kiszűrése után az oldatot bepároljuk, és a maradékot jeges vízzel eldörzsöljük. 0,41 g (92%) szabad heptapeptidet (XHIa) kapunk. Rf: 0,42. A fenti anyag 0,67 g-ját (0,75 mmól), valamint 0,37 g (0,75 mmól) karbobenzoxi-L-piroglutamil-L-prolin-p-nitrofenilésztert (XlVa) 0,105 ml (0,75 mmól) trietilaminnal együtt oldunk 1,5 ml dimetilformamidban, majd az oldatot két napon át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A keletkezett gélt 1 n citromsav oldattal eldörzsöljük, szűrjük, citromsav oldattal és vízzel mossuk, szárítjuk, majd éterrel mossuk és ismét szárítjuk. 0,85 g (92%) védett nonapeptidet (XV) kapunk. Op.: 183—185 C°. Rf: 0,5. ' Analízis: C60H 86 O la N 10 (1235,37); számított: C 58,3, H 7,0, N 11,3; talált: C 58,5, H 7,2, N 11,2. Z-Leu-Met-NH2 (XVIIIa) előállítása. Toluolban oldott 125 mmól karbobenzoxi-L-leucinhoz (XVI) 60 ml kloroformot, 17,5 ml (125 mmól) trietilamint és —10 C° alá hűtve 12,5 ml (kb. 125 mmól) klórszénsav-etilésztert adunk. Tíz perc keverés után 0 C° alatt 125 ml kloroformban oldott 25 g (125 mmól) L-metionin-metilészter-klórhidrátot (XVII) és 17,5 ml (125 mmól) trietilamint csepegtetünk, (ha szükséges több részletben 50 ml kloroformmal beöblítjük az észter — trietilamin-klórhidrát 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
