151922. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a vérben jelenlevő, sztreptokinázzal nem aktiválható fibrinolitikus proenzimek aktiválását elősegítő termék előállítására emlős állatok szerveiből

151922 7 8 dával 9-es pH-ra állítjuk be. Centrifugálás után az első extraktummal egyesítjük a mosófolyadékot, azután lassan és állandó keverés közben, a 3-as pH fenntartása mellett, két térfogatnyi, telített nátriumklorid oldatot adagolunk, miközben a hőmérséklet 2 és 4 C° között marad. A kivált csapadékot szűréssel összegyűjtjük és 50 liter desztillált vízben oldatba visszük, miközben a pH-t 3-ra állítjuk be ügyelve arra, hogy a hőmérséklet 4 C° körül legyen. Ezután 1-térfogat telített nátriumklorid oldatot adunk a keverékhez, hogy a csapadékot a glicerines oldatból teljesen leválasszuk. A csapadékot 200 liter vízben feloldjuk, az oldódást esetleg sósav hozzáadásával segítjük. Az oldatot, amelynek víztisztának kell lennie, szóda segítségével 5,3 pH-ra állítjuk be. Az oldatot 18 órán át kb. + 4 C°-on tartjuk ügyelve, hogy a pH-ja 5,3 legyen, Az ily módon kivált csapadékot szűréssel összegyűjtjük és 5 liter 5%-os ecetsavba visszük, majd háromszor egymás után azonos térfogatú tioéterrel kezeljük. Egy térfogat telített nátriumklorid oldatot, adunk a vizes frakcióhoz és a pH-ját 3-ra állítjuk be sósav segítségével. A kivált csapadékot szűréssel elválasztjuk és ezután vízben feloldjuk, majd 4 C°-ra hűtött vízzel szemben dializáljuk. A dializáit oldathoz elegendő mennyiségű telített magnéziumszulfátot adunk, hogy a telítési érték 15%át elérjük. 3 óra hosszat 4 C°-on tartjuk és a kivált csapadékot szűréssel eltávolítjuk. A csapadékot fele térfogatnyi 15%-os telítettségű magnéziumszulfáttal mossuk. A mosófolyadékot és a szürletet egyesítjük, azonos térfogatú telített nátriumklorid oldatot adunk hozzá, majd a pH-t 3-ra állítjuk be sósav segítségévei. A kivált csapadékot azonnal elválasztjuk centrifugálással, majd minimális mennyiségű desztillált vízben feloldjuk és 4 C"-ra hűtött vízzel szemben dializáljuk. A dializáit oldat pH-ját szódával 8-ra állítjuk be. A hőmérsékletet 30 C°-ra emeljük és állandó keverés közben 25 mg kristályos alfakimotripszint adunk hozzá olyan adagokban, ahogy a hidrolizálás előrehalad, a pH-t pedig szódával 8-ra állítjuk be. A hidrolízist 3-as pH-ra való savanyítással megállítjuk, a savanyítást sósavval végezzük; amint az oldatból csapadék már nem válik ki, a pH-t 7-re állítjuk be. Ezért egy térfogat telített nátriumklorid oldatot adunk hozzá, a csapadékot centrifugálással azonnal összegyűjtjük állandó hűtés közben, majd 2 liter desztillált vízben feloldjuk, amelyhez 2 térfogat előzőleg —2 C°-ra hűtött etilalkoholt adunk. Az adagolást lassan kell végezni, figyelve arra, hogy a hőmérséklet soha se menjen 0 C° fölé. A kiváló csapadékot centrifugálással gyorsan elválasztjuk 0 C° alatti hőmérsékleten. A csapadékot erős vákuumban elválasztjuk az alkoholtól, majd 10 liter desztillált vízben elkeverjük és szóda adagolásával a pH-t 5,3-ra állítjuk be. Ezután a reakciókeveréket 24 óra hosszat +4 C°-on tartjuk. A kiváló csapadékot hűtött centrifugában lecentrifugáljuk és desztillált vízben esetleg sósav hozzáadásával feloldjuk, majd az oldatot liofilizáljuk. Az így nyert termék 5-ös pH alatti oldatban, valamint 7-es pH fölött oldható. 3. példa: 50 kg emberi méhlepényt megtisztítunk a mellette levő szövetekből és desztillált vízzel lemosunk, majd alacsony hőmérsékleten és feltétlenül —10 C° alatt összetörjük, pépesítjük, majd állandó keverés közben 1050 liter oldattal extraháljuk. Az extraháló oldat összetétele: 900 liter desztillált víz, 150 liter glicerin, 6,3 kg nátriumklorid, és annyi p. A. tisztaságú sósav, hogy a pH 1,6 legyen. Az extrakció alatt a közeg hőmérsékletét 0 C° közelében kell tartani. A macerációt 2 óra hosszat, keverés közben folytatjuk figyelve a pH-t, melyet sósav segítségével esetleg 1,8—2-re állítunk be. A szilárd frakciót szűréssel elválasztjuk olyan szűrőpréssel, amelyet hűtőközeg cirkuláltatásával +2 C°-on tartunk. A tiszta oldathoz 5 kg derítőanyagot adunk, azután a pH-ját 8,9-re állítjuk be és a kiváló könnyű csapadékot, amely a derítőanyagon adszorbeálódik, hűtött szűrőpréssel azonnal eltávolítjuk. A szűrőprést előzetesen, desztillált vízzel, +4 C°-ra hűtjük. A tiszta szürletet apránként, szűrés közben, sósavval megsavanyítjuk, hogy a pH-ja 3 legyen. Ezután lassan annyi telített magnézium szulfát oldatot adunk az elegyhez, hogy a végső koncentrációja a 0 C°-on mért telítettség 20%-a legyen. Ezután 2 óra hosszat állni hagyjuk, majd a kiváló csapadékot leszűrjük, a tiszta szürlethez 1 térfogat telített nátriumklorid oldatot adunk. Az így nyert csapadékot szűréssel elválasztjuk és erős vákuumban szárítjuk, vigyázva arra, hogy a hőmérséklet ne menjen 20 C° fölé. Végül a száraz poralakú terméket állandó keverés közben 20 liter 70%-os alkoholban szuszpendáljuk miközben a hőmérsékletet + 5 C°-on tartjuk. Egy óra keverés után az alkoholos csapadékot leszűrjük vigyázva, hogy a hőmérséklet állandóan +5 C°-on maradjon, majd ugyanilyen mennyiségű alkohollal teljesen azonos körülmények között megismételjük a műveletet azon igyekezve, hogy a nátriumklorid nyomait is eltávolítsuk a csapadékból. Az alkoholt vákuumban elpárologtatjuk és a száraz anyagot 100 liter desztillált vízben elkeverjük, majd a +4 C°-os reakciókeverék pH-ját 5,3-ra állítjuk be. 18 óra állás után, miközben vigyáztunk arra, hogy a hőmérséklet +4 és +6 C° között legyen, a kiváló csapadékot szűréssel eltávolítjuk és 3 liter 5%-os ecetsavban feloldjuk, azonos mennyiségű etiléterrel elkeverjük, a vizes fázist leeresztjük, és annyiszor ismételjük meg ezt a műveletet, míg az éteres fázis már nem színeződik. Ezután az ecetsavas oldathoz 1 térfogat telített nátriumklorid oldatot adunk, a kiváló csapadékot hűtés közben centrifugálással azonnal elválasztjuk, majd a csapadékot desztillált vízben ismét feloldjuk. Hűtött, áramló ioncserélt vízzel szem-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4