151922. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a vérben jelenlevő, sztreptokinázzal nem aktiválható fibrinolitikus proenzimek aktiválását elősegítő termék előállítására emlős állatok szerveiből
9 151922 10 ben diolizáljuk, majd fagyasztjuk és liofilizáljuk. A következő példa megvilágítja a találmány szerinti eljárás alkalmazását valamilyen marha-profibrinóTizin aktivációjára, (amely sztreptokináz jellegű anyagokkal közvetlenül nem aktiválható) a találmány szerinti eljárás során előállított olyan anyag segítségével, amely a fibrinolitikus proenzimek aktivációját mozdítja elő. 4. példa: A marha profibrinolizin aktivációs folyamatát a következő módon végezzük: a találmány szerinti eljárással készített termékeket egy kémcsősorozatban helyezzük el, amelyet vízfürdőn 37 C°-on tartunk. Ezután hozzáadjuk a sztreptokinázt, a trombint és a marha-íibrinogént. amelyet megfelelő módszerrel úgy készítettünk, hogy marha-profibrinolizint tartalmazzon. Ezután megfigyeljük a fibrin-lepény oldódását,, amely függ a hozzáadott anyagok mennyiségétől. Ha ebben az eljárásban nem adagoljuk a találmány szerinti eljárással készített terméket, akkor a kivált vérlepény oldódását csak igen hosszú idő (több óra) után figyelhetjük meg. Első sorozat: Az 1. példában leírt eljárással készített anyagból az alább meghatározott mennyiségeket adagoljuk a következő reakciókeverékhez: 125 egység sztreptokináz („Varidase"), 0,12 mg trombin, 1 marha-fibrinogén, amely 1 mg profibrinolizint tartalmaz ml-ként. A vérrög oldódását megfigyeljük és azt tapasztaljuk, hogy a hozzáadott termék mennyiségétől függően a következő idők alatt oldódik: 0,33 fig termék 0,66 ng termék 1,32 Mg termék 1,98 fíg termék Második sorozat: 30'55" oldódási idő 18'35" oldódási idő 12'35" oldódási idő 10'40" oldódási idő A 2. példában leírt eljárás révén nyert anyagot használjuk fel az alább felsorolt mennyiségekben és figyeljiiK a keletkezett vérrög oldódását. Az egyéb összetevők mennyiségei azonosak az előző feladatban leírtakkal. 0,5 fig termék 1 /xg termék 2 fig termék 3 fig termék 22'35" oldódási idő 16'25" oldódási idő 11'30" oldódási idő 9'55" oldódási idő í Ez az aktiválási folyamat lehetővé teszi a marhaplazma teljes biokémiai defibrinációját. A fenti példák azt mutatják, hogy bármelyik megvalósítási módját alkalmazzuk a találmánynak, a nyert termék a vérben jelenlevő fibrinolitikus proenzim aktivációját elősegíti. A találmány szerinti eljárás a fenti ismertetés alapján teljesen érthető. A vérben jelenlevő fibrinolitikus proenzim aktiváci óját előmozdító termék előállítására 5 szolgáló eljárásnak az előző eljárásokhoz képest számos előnye van, főleg mert lehetőséget nyújt az említett termék elválasztására és a fibrinogénhez való hozzáadására olyan körülmények * között, amelyeknél a fibrinogénből trombin ha-10 tására vérrögöt vált ki és megvalósítható ennek a vérrögnek a gyors feloldása. A fentiek a találmány felhasználását világították meg és sem a megvalósítási módjára, sem a felhasználási módjára nem jelentenek korlátozást, hanem ma-15 gukban foglalják az összes variánsokat anélkül, hogy a találmány körét korlátoznák. 20 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a vérben jelenlevő, sztreptokinázzal közvetlenül nem aktiválható fibrinolitikus proenzimek, főleg a profibrinolizin aktiválását elősegítő termék előállítására emlős állatok szer-25 veiből, főleg méhlepényekből, különösen pedig emberi méhlepényből kiindulva azzal jellemezve, hogy stabilizátor hatású közegben, célszerűen savas glicerin oldatban extraháliuk az. említett termékben dús frakciót emlős állatok 30 szerveiből, főleg emberi szervekből és különösen méhlepényből, majd az extrakciós közegben levő euglobulinokat kicsapjuk, nem-ionizált közegben, enyhén savas pH-n, és a szennyezéseket megfelelő vegyszerekkel, pl. lúgokkal, sókkal 35 vagy szerves oldószerekkel eltávolítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, melynek jellemzője, hogy a fibrinolitikus proenzimek aktiválását elősegítő termékben dús frakciót «úgy állítjuk elő emlős állatok 40 szerveiből, különösen pedig emberi szervekből, főleg méhlepényből, hogy az említett szerveket alacsony hőmérsékletre hűtjük, célszerűen —10 C° alá, majd a fagyasztott szerveket maceráljuk vizes közegben, amely valamilyen stabilizátort, 45 például glicerint tartalmaz, savas hatású és pH-ja 5 vagy ennél kisebb, 0 C° körüli hőmérsékleten, majd a macerálás során keletkezett folyékony frakció pH-ját lúgosítással beállítjuk és ezzel a szennyezések kicsapódását elősegít-50 jük, a megtisztított oldatot, melynek pH-ját savanyítással beállítottuk, telített nátriumklorid oldattal kezeljük, ezt követően a fehérje-csapadékban levő sókat megfelelő módszerrel, pl. dialízissel eltávolítjuk, majd a közeg pH-ját enyhe 55 savanyítással 5 és 6 közé állítjuk be, majd az euglobulinokat tartalmazó csapadéktól megtisztítjuk az oldatot és savas közegben feloldjuk ezeket az euglobulinokat és telített magnéziumszulfát oldattal hozzuk össze, majd a tiszta 60 oldathoz ismét telített nátriumklorid oldatot adunk, amely a fehérjedús frakciót kicsapja és így előállítjuk a fibrinolitikus proenzimek aktiválását elősegítő terméket. 3. Az előző igénypontok szerinti eljárás to-85 vábbfejlesztése, melynek jel'omzője, hogy az 1. 5
