151922. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a vérben jelenlevő, sztreptokinázzal nem aktiválható fibrinolitikus proenzimek aktiválását elősegítő termék előállítására emlős állatok szerveiből

151922 3 ' 4 belső szerveket es íoleg a méhlepényt fagyasztó eljárásnak vetjük alá, a lehető legalacsonyabb hőmérsékleteken, előnyösen —10 C° alatt, majd pedig a fagyasztott szerveket maceráljuk vizes közegben, amely valamilyen stabilizáló anyagot, a pl. glicerint tartalmaz és amelynek pH-ja 5 vagy ennél kisebb, 0 C° közelében. Ezután a maceráció után megmaradt egyetlen folyadék-fázist lúgossá tesszük és a szennyezéseket kicsapjuk. A fázis ugyanis inhibitor anyagokat 10 és színezőanyagokat is tartalmaz, amelyeket eltávolítunk. Most a fázist savasra állítjuk be és telített nátriumklorid oldattal kezeljük. így a proteineket teljes mértékben kicsapjuk, majd a protein csapadékban jelenlevő sókat valamilyen 15 eljárással pl. dialízissel eltávolítjuk és ily módon nem-ionos oldatot kapunk, majd enyhe savanyítással, előnyösen 5—6 közötti pH-n az euglobulinokat kicsapjuk. A kicsapott euglobulinok tisztítására savas közegben feloldjuk őket, 20 majd telített magnéziumszulfát oldatot adunk hozzá a szennyezések kicsapása érdekében és j végül a kívánt termékben dús protein-frakció lecsapására telített nátriumklorid oldatot adunk a reakcióelegyhez. 25 A találmány szerinti eljárás előnyös megvalósítási módja szerint az eljárás során előállított protein-frakciót valamilyen proteolitikus enzimmel, pl. alfakimotripzinnel kezeljük, amely az említett frakcióban levő inaktív és oldhatat- 30 lan proteineket hidrolizálja és ezáltal oldhatóvá teszi. A proteolitikus enzim hatását állandóan ellenőriztük, nehogy a kívánt termék aktivitását tönkretegye. A találmány szerinti eljárás során előállított 35 termék, amely a vérben jelenlevő fibrinolitikus proenzim aktivizálását elősegíti, szilárd anyag, gyengén színes vagy fehér, vízben és izotonikus oldószerekben oldható, valamint olyan alkoholos oldatokban is oldható, melyek titerje 45 GL 40 foknál kisebb, azonban ezekből a vizes oldatokból egyes ásványi sókkal kicsapható, például 50%-ig telített nátriumklorid oldattal savas közegben. Mivel a termék a fehérjék általános jellem- 40 zőit mutatja, pozitív biuret és Miliőn reakciókat ad; a kutatás jelenlegi állapotában a szerkezetét nem ismerjük, de biztos, hogy szárazon állandó és oldott állapotban savas közegben állandóbb, mint lúgos közegben, valamint hidegen 50 állandóbb, mint melegen. Minthogy a vérben levő fibrinolitikus proenzim aktivációjában résztvevő termék szerkezete jelenleg még ismeretlen, azonosítására nem tudunk egyéb jellemzőket megadni, mint az előállítási folyamat pontos leírását valamint a termék biokémiai tulajdonságait. A találmány szerinti eljárás során létrehozott olyan frakció biokémiai aktivitása, amely az említett fibrinolitikus proenzim akti vációját elősegítő terméket feldúsítva tartalmazza, főleg azáltal határozható meg, hogy ennek a frakciónak a szenzibilizáló hatását vizsgáljuk a profibrinolinin és pl. a sztreptokináz között végbemenő reakciónál olyan esetekben, amikor a sztreptokináz egyébként nem fejt ki közvetlen hatást. A pro-fibrinolizint, amelyet plazminogénnek is nevezünk, aktivációval alakítjuk át fibrinolizinné, amelyet plazminnak is nevezhetünk. Egyes profibrinolizineket főleg az emberi eredetű normál profibrinolizint sztreptokinázzal közvetlenül aktiválhatunk, más profibrinolizineket ez utóbbi anyaggal nem lehet közvetlenül aktiválni; vonatkozik ez az olyan állati eredetű vérből előállított profibrinolizinek esetére, amelyeket marha, disznó vagy egyéb háziállat vérből és belső részekből készítettünk. Az ilyen állati vérnél a fibrinolitikus enzim által létrehozott, erjedést okozó enzim aktiválását sztreptokináz segítségével csak indirekt módon lehet végrehajtani, mégpedig emberi plazma hozzáadásával, vagy pedig a találmány szerinti eljárás során létrehozott termék segítségével. így ha marha fibrinogen oldathoz, amely pro-fibrinolizint tartalmaz, minden szokásos marha-fibrinogén készítmény tartalmaz pro-fibrinolizint, sztreptokinázt adunk miután a vérrög kicsapódását megfelelő mennyiségű trombin hozzáadásával biztosítottuk, az így keletkezett fíbrinrög stabil és csak elég hosszú állási idő után (több óra) oldódik vagy oszlik el. Ezzel szemben, ha a marha fibrinogen oldathoz, amely pro-fitírinolizint és sztreptokinázt tartalmaz, a találmány szerinti eljárással előállított, a fibrinolitikus proenzim aktiválásában közreműködő termékben dús frakciót adunk, a trombin hozzáadására létrejött vérrög azonnal feloldódik. Ez a biokémiai tulajdonság lehetővé teszi, hogy meghatározzuk az említett feldúsított frakció aktivitását, amelyet a találmány szerinti eljárással a fibrinolitikus proenzim aktiválására használhatunk. Másfelől az említett biokémiai tulajdonság a különböző készítmények aktivitásának összehasonlítását is lehetővé teszi, mely készítmények az említett aktivizáló terméket nagy mennyiségben tartalmazzák. Az említett tulajdonság alapvetően a találmány szerinti eljárás során készített termék tulajdonsága és összehasonlítható az olyan anyagok tulajdonságaival, amelyeket egyes szerzők pro-aktivátornak neveznek. Ha összeöntünk marha fibrinogen oldatot emberi profibrinolizinnel vagy a találmány szerinti eljárással készített olyan frakcióval, amely a fibrinolitikus proenzim aktiválásában résztvevő terméket feldúsítva tartalmazza, és sztreptokinázt is adagolunk, akkor a meghatározott mennyiségű trombin hozzáadására keletkezett vérrög annál gyorsabban feloldódik vagy szétoszlik/minél nagyobb mennyiségű a keletkezett enzim, amely ily módon lehetővé teszi, hogy kidolgozzunk valamilyen összehasonlító módszert a fibrinolitikus pro-enzim aktiválásában résztvevő terméket tartalmazó frakció aktivitására, amelyet az emberi profibrinolizim előállításához összehasonlító anyagként használhatunk. 1. Ha a felhasznált fibrinogen közönséges marhafibrinogén azaz fölös profibrinolizint tartalmaz, akkor meghatározzuk az anyagban je-10 15 20 J 25 30 35 40 4ó 50 55 60 2