151802. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tetraciklin típusú antibiotikumok tisztítására
5 151802 6 majd 2x éterrel mossuk. Vákuumban szárítjuk 40 C"-on. Kapott termék 76 g (96 gamma/ /mg antibiotikum tartalom: 68,4 g). A piperazin származékot 1,4 1 desztillált vízben oldjuk, kevés szénnel derítjük és tisztára szűrjük. Keverés közben lassan hozzáfolyatjuk 140 ml 20%-os Na2 Sö0 4 vizes oldatát, a pH-t 4,5—5-re állítjuk, rövid időn belül kiválik a tetraciklin hidrát. Pár órai állás után a kivált kristályokat leszűrjük, Ix desztillált vízzel, lx acetonnal mossuk és szárítjuk, vákuumban 40 C°-on, 10 órán keresztül. A kapott tisztított tetraciklin hidrát 61,8 g, 982 gamma/mg (antibiotikum tartalom: 60,69 g). A kitermelés kiindulási bázisra számítva 81,2%-os! 5. 15 1 3,8 mg/ml (antibiotikum tartalom: 57 g) tetraciklint tartalmazó szűrt savas fermentlevet ellenáramú extrakciós módszerrel extráhálunk 20 1 n-butanollal. A butanolos kivonatókat egyesítve szűrjük és térfogatának 1/2.0 részére koncentráljuk vákuumban. Kevés szénnel derítve szűrjük. 700 ml 62 000 gamma/ /ml aktivitású '(antibiotikum tartalom: 43,4 g) oldatot kapunk. Az oldatot 40—45 C°-ra melegítjük, majd 11 ml 37%-os formaiint és 18 g 90. ml n-butanolban oldott piperazin • öH^O-t adunk Hozzá. 25'-ig keverjük, 40—45 C°-on, majd 15—18 C"-ra hűtve a kivált terméket szűrjük, isopropanollal, abs. alkohollal és éterrel mossuk. Szárítva 44 g sárga, vízben jól oldódó amorf anyagot kapunk, 910 gamma/mg aktivitással '(antibiotikum tartalom: 40,04 g). Az anyagot az 1. példában leírtak szerint redukálva 30 g kristályos tetraciklin hydrátöt izoláltunk 970 gamma/mg aktivitással {antibiotikum tartalom: 29,1 g). Kitermelés fermentiere vonatkoztatva 51%. 8. 15 1 fermentlé <(3450 gamma/ml, antibiotikum tartalom: .51,75 g) pH-ját 'NaOH-val 9-re állítjuk és leszűrjük. A mycéliumos masszát 20 1 n-butanolban, szüszpendáljuk, majd ä keverék pH-ját cc. HCl^al 2-re állítjuk be. A butanolos fázist szeparátorral elválasztjuk és a maradékot további 10 1 n-butanollal kikeverjük. A két butanolos kivonatot egyesítjük, szűrjük és vákuumban bekoncentráljuk. Bepárlás után 750 ml oldatot kapunk 56 000 gamma/ml aktivitással, {antibiotikum tartalom: 42 ?). EbbőJ az oldatból az előző példa szerint elvégezve a kondenzációt és redukciót 28 g tetraciklin hydrátöt nyerünk 960 gamma/mg aktivitással, {antibiotikum tartalom: 26,88 g). Kitermelés.: 52%. 7. 200 g tetraciklin cetil-piridinium bromidból (395 gamma/ml, antibiotikum tartalom: 79 g) indulunk ki és az 1. példa első bekezdése szerint a butanolos oldatot elkészítjük. A butanolos oldat 900 ml, 64 800 gamma/ml aktivitású, (antibiotikum tartalom: 58,32 g).- Felmelegítjük 45—50 C°-ra, állandó keverés közben hozzáadunk 14 ml 37%-os formaldehidet és 18 ml morfolint, melyet előzőleg 30 ml n-butanolban oldottunk. 20—25'-ig keverjük, a hőfokot 45—50 C°-on tartjuk; sárga amorf tetraciklin származék válik ki. Pár órai állás után 15 —18 C°-ra lehűtjük és szűrjük, n-butanollal, isopropanollal és 3x éterrel mossuk a csapadék kot. Szárítjuk 40 C°-on vákuumban. A kapott termék 59 g, 908 gamma/mg aktivitású (anti-5 biotikum tartalom: 53,57 g). Az ily módon nyert anyagot 1,2 1 desztillált vízben oldjuk, kevés szénnel derítjük és tisztára szűrjük. 120 ml 20%-os iNaaSs'C^ oldattal keverés közben redukáljuk. A redukció hatására kiválik a sárga 10 tetraciklin hydrát kristályosan. A pH-t ellenőrizzük és ha szükséges, 4,5—5,5-re állítjuk. Rövid ideig állni hagyjuk, majd a kristályokat leszűrjük, mossuk és 40 C°-on szárítjuk \ákuumban 8—10 órán keresztül, s ily módon 15 51,8 g 965 gamma/mg aktivitású tetraeikiint kapunk (antibiotikum tartalom: 49,99 g). Kiindulási bázisra számítva a kitermelés 63,4%. 8. 250 g 6-deoxy-tetraciklin-laurilacetát-piridinium kloridot {36Ö gamma/mg, antibiotikum 20 tartalom: 90 g), az 1. példában leírt módon elbontunk, butanollal extraháljuk, kondenzáljuk és redukáljuk Na2 S 2 04-fel. A nyert 61,25 g tetraciklin aktivitása 970 gamma/mg, {antibiotikum tartalom: 59,41 g). Kiindulási bázisra szá-25 mított kitermelés: 66,3%. 9. 100 g oxitetriciklin Ca-sót {520 gamma/ /mg, antibiotikum tartalom: 52 g) 500 ml metanolban szuszpendálunk és metanolos sósavval a pHlját 5-re állítjuk, majd kevés szén-30 nel derítve szűrjük. A szűrletet 45 C°-ra melegítjük, majd keverés közben 12 ml 37%-os formalin és 19 g piperazin 6 HaO-t 80 ml ributanolos oldatát adjuk hozzá. 20' keverés után 10—15 C°-ra hűtve szűrjük. 35 A terméket isopropanollal, 2x abs. alkohollal mossuk. Szárítva 42,5 g sárga terméket kapunk 870 gamma/mg aktivitással (antibiotikum tartalom: 36,97 g). A terméket 1 1 vízben szüszpendáljuk, 11. g almasav hozzáadásával 40 oldatba visszük, majd 40 ml 20%-os Na2S204 oldatot adunk hozzá. 1 óra keverés után a kikristályosodó oxitetraciklin dihidrátot szűrjük, mossuk és megszárítjuk. 29 g terméket kapunk 900 gamma/mg aktivitással, ^antibiotikum 45 tartalom: 26,1 g). Kitermelés: 50,2%. 10. 200 g klórtetraciklin Ca-sót 1(550 gamma/mg, antibiotikum tartalom: 110 g) 350 ml desztillált vízben szuszpendálunk, a pH-t 2-re állítjuk 30 ml cc. HCl-el. 50 ml telített oxál-50 sav oldatot adunk hozzá és leszűrjük; ha szükséges, még oxálsavat adunk a Ca2+ ionok lecsapásához. Utána 35 g NaCl-t adunk hozzá és 150 ml n-butanollal extraháljuk, majd 2x 17,5 g (NaCl-t adunk hozzá és 2x150 ml n-butanol-55 lal extraháljuk. A kapott oldatot térfogatának 2/3-ára bepároljuk. A butanolos oldatot az 1. példa szerint kondenzáljuk piperazin- 6H2O val és 37%-os formaiinnal. A nyert tetraciklin származék 85,5 g 900 gamma/mg aktivitású, 60 (antibiotikum tartalom: 77,8 g). Az ily módon nyert terméket 1600 ml desztillált vízben old». juk és keverés közben 160 ml 20%r-os Na2S2Ö4-el redukáljuk, a kivált kristályokat az 1. példa szerint szűrjük, mossuk, és szárítjuk. A ki-65 nyert anyag 81,7 g 985 gamma/mg aktivitású 3
