151802. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tetraciklin típusú antibiotikumok tisztítására
3 151802 4 tuk, hogy a redukció a kondenzációs termékeket a savamid nitrogén és a metilén-híd szénatomja közötti kötésnél bontja. A redukció után keletkezett termék izolálása és analízise (morfolin és piperazin tartalmú anyag esetén), azt mutatta, hogy a redukció során a tiszta tetraciklin' mellett a szerves amin N-metil származéka (piperazin esetében N,íN'-dimetil-piperazin) képződik. Az ily módon tisztított terméket önmagukban ismert módszerekkel a gyógyászatban közvetlenül felhasználható termékké alakítjuk át, vagy valamely más tetraciklin-típusú vegyület előállításához használhatjuk fel. A találmányunk alapját képező eljárás előnye, hogy jó kitermeléssel magas tisztaságú végterméket* állít elő. Eljárásunk további részletei a példákban találhatók. Példák: 1. 220 g tetraciklin-centilpiridinium bromidot (395 gamma/mg, antibiotikum tartalom: 86,3 g) 500 g vízben szuszpendálunk, 50 ml cc. sósavval a pH-ját 2-re állítjuk, majd keverés közben 200 ml 26%-os K/»Fe(GN)6 oldatot és 100 ml telített oxálsav oldatot adunk hozzá. Szűrés után a csapadékot 4x150 ml 0,01 n HCl-al mossuk, majd az egyesített szűrlethez (1,3 1 és 61 000 gamma/ml, antibiotikum tartalom 79,3 g) 20% (súly/tf) konyhasót adunkés az elegyet 3x350 ml n-butalonnal extraháljuk. A butaionos kivonatokat egyesítjük, kevés szénnel derítve szűrjük és a szűrletet térfogatának 80%-ára koncentráljuk vákuumban, ily módon 965 ml (66 000 gamma/ml, antibiotikum tartalom: 63,69g) tetraciklin tartalmú oldatot kapunk. A 965 ml butanolos oldatot felmelegítjük 40 —45 C°-ra, keverés közben hozzáadunk 16 ml 37%-os formaiint és 26 g piperazint-hexahidrátot 130 ml n-butanolban oldva. Az elegyet 20'-lg keverjük 40—45 C°-on, majd 15—20 C°ra hűtve szűrjük. Isopropanollal, abs. alkohollal, végül éterrel mossuk. Vákummban szárítjuk és 65,2 g világos sárga, vízben kitűnően oldódó amorf port kapunk, 920 gamma/mg aktivitással (antibiotikum tartalom: 59,98 g). A terméket 800 ml desztillált vízben oldjuk és 100 ml 20%-os JNTa2 S 2 0 4 oldatot adunk hozzá, majd az elegy pH-ját 5n HCl-lel 4,5—6,0-ra állítjuk. 1 órát keverjük 20 C°-on, miután szűrjük, desztillált vízzel, majd acetonnal mossuk és szárítjuk. 50 g halványsárga, kristályos terméket kapunk 990 gamma/mk «(antibiotikum tartalom: 49,5 g) aktivitással. A termék kémiai analízise és papírkromatográfiás azonosítása azt mutatta, hogy az anyag tiszta tetraciklin. Kitermelés kvaternersóra számítva 57%. Az így előállított anyag gyógyászati célokra teljesen alkalmas, antibiotikum. 2. 100 g tetraciklin-Ca sót i(520 gamma/mg, antibiotikum tartalom: 52 g) 400'ml vízben szuszpendálunk és a pH-t 22 ml cc. HCl^al 2-re állítjuk, 40 ml telített oxálsav oldatot adunk hozzá, majd leszűrjük. A szűrlethez 75 g konyhasót, adunk, majd 3x250 ml n-butanollal extraháljuk.. A butanolos kivonatokat egyesítjük, 5 kevés szénnel derítve szűrjük, majd a szűrletet térfogatának 4/5-ére koncentráljuk vákuumban. 650 ml (65 000 gamma/ml, antibiotikum tartalom: 42,9 g) aktivitású butanolos oldatot kapunk. Az oldatot 40—45 C°-ra mele-10 gítjük. Keverés, közben 10 ml 37% formaiint és ' 16 g piperazin. 6iH2 0 80 ml butanollal készült oldatát adjuk hozzá, 20'-ig keverjük 40—45 C°-on, majd 15—18 C°-ra hűtve szűrjük, isopopanollal, abs. alkohollal és éterrel mossuk. ,15 Megszárítva 42,8 g világossárga, vízben kitűnően oldódó terméket nyerünk 935 gamma/mg aktivitással, '(antibiotikum tartalom: 40 g). Az anyagot az 1. példában ismertetett módon redukáljuk és a reakcióelegyből a tetraciklint 20 izolálva 33,2 g kristályos terméket nyerünk 995 gamma/mg aktivitással (antibiotikum tartalom: 33,03 g). A termék tiszta tetraciklinnek bizonyult. (Kitermelés Ca-sóra vonatkoztatva . 63,4%. 25 3. 500 g tetraciklinhidrátot (780 gamma/mg, antibiotikum tartalom: 390 g) 390 g n-butalon- • ban oldunk, az oldatot 40—50 C°-ön melegítjük és G—4-es szűrőn szűrjük. A szűrlethez 40— 45 C°-on, keverés közben lassan hozzáadunk 30 90 ml formaiint és 160 g piperazin-hexahidrátot 550 ml n-butalonban oldva 45—50 C°-on, hozzáadás előtt G—4-es szűrőn szűrve. A keverést 20 percig folytatjuk, miközben az anyag hőmérséklete 40—45 C°. Utána 18—20 C°-ra 35 lehűtve G—4-es szűrőn szűrjük, i-propanollal, abs. alkohollal és. 2x éterrel mossuk, 40—45 C°-on vákuumban szárítjuk. A kapott termék 380 g (935 gamma/mg, antibiotikum tartalom: 355 g). A kapott terméket {halványsárga por) 40 feloldjuk 7 1 desztillált H^O-ban, kevés szénnel derítjük, szűrjük Seitz lapon és üvegszűrőn. Keverés közben az anyaghoz 700 ml 20%-os Na^CVet adunk, a pH-t 4,5—5-re állítjuk, s a redukció hatására kiválik kristályosan a 45 tetraciklin hidrát. Pár órás állás után leszűrjük G—4-es szűrőn, desztillált vízzel, acetonnal mossuk és szárítjuk 40 C°-on vákuumban. A kapott termék halványsárga kristályos pou, 296 g ('980 50 gamma/mg, antibiotikum tartalom: 290,08 g). Kiindulási anyagra számítva 76%-os kitermelési hatásfokot értünk el. A kapott termék papírkromatográfiás meghatározása csak tetraciklint mutatott ki. 55 4. 100 g nyers tetraciklin HCl-t i(750 gamma/ml, antibiotikum tartalom: 75 g) n-butanolban szuszpendálunk. 50 C°-ra melegítve keverjük és lassan hozzáadjuk 40 g piperazin•6H2 G-nak 140 ml n-butanollal készült oldatát. 60 Az anyag pH-j át trietilaminnal 6,8—7,2-re állítjuk, miközben az oldat kitisztul. Ezután hozzáadunk 25 ml 37%-os formaiint, 15—20'-ig kevertetjük, a hőmérsékletet 40—50 C°-on tartjuk. A kivált anyagot 18—20 C°-ra hűtve le-65 szűrjük és isopropanollal, abs. etilalkohollal, 2
