151698. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új nonapeptidamid előállítására

151698 15 b) l-(L-szeril)-2-(terc. butoxikarbonil)-hidrazin-benzolszulf onát: 14,8 g i(41,9 millimól) l-<iN-karbobenziloxi-L-szeril)-2-(terc. butoxikarbonil)-hidrazint 250 ml 5 metanolban oldunk és az oldatot palládiumos aktívszén katalizátor (10% Pd) jelenlétében hidrogénáramban hidrogénezzük. A katalizátort azután kiszűrjük és a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk. A visszamaradó olajat abáz. 1" éterrel kétszer extraháljuk, majd vákuumban megszárítjuk. A szilárd habszerű alakban nyert terméket közvetlenül dolgozzuk fel tovább. A fenti módon kapott nyers terméket jellemzés céljából az alábbi módon alakítjuk át kri's- la tályos benzolszulfonáttá: 2,8 g benzolszulfonsavat 6 ml metanolban oldunk, az oldatot 0° hőmérsékletre hűtjük le és hozzáadjuk 3 g (13,7 millimól) l-i(L-szeril)-2--(terc. butoxikarbonil)-hidrazin 6 ml metanollal ° készített jéghideg oldatához. A benzolszulfonát 150 ml vízmentes éter hozzáadása után olajszerű alakban leválik, ezt kapargatás útján kristályosodásra bírjuk. A kapott krisCalyos terméket leszűrjük, metanol és éter elegyével ^ mossuk és tisztítás céljából etanol és éter elegyéből kétszer átkristályosítjuk. Az így kapott termék 151,5—153,5°-on bomlás közben olvad; MD = +14,4° (c = 1,96 metanolban). 30 Vékonyrétegű kromatografálás során a termék a benzol/etanol 7 :3, metanol/klorofarm/17% NH;)

2:2:1 és n-butanol/piridin/jégecet/víz 90 : 60 : 18 : 72 rendszerekben csupán egyetlen foltot mutat. Kimutatás: ninhidrin-módszer. c) l-(N-karbobenzüoxi~L-izoleucil-L-szeril-2--(terc. butoxikarbonil)-hidrazin: 40 2,7 g 1(12,35 millimól) l~í('L-szeril-)-2-(terc. butoxi-karbonil)-hidrazin és 4,77 g (12,35 millimól) N-karbobenziloxi-fL-izoleucin-p-nitrofenilészter [előállítva pl. M. Bodánszky és V. DuVigneaud, J. Am. Chem. Soc. 81, 5688 (19S9) szerint] 45 24 ml etilacetáttal készített oldatát 48 óra hoszszat keverjük 13—14° hőmérsékleten. Kb. 7 óra múlva a védett dipeptid kezd kiválni. Végül a reakcióelegyet 0° hőmérsékletre hűtjük, leszűrjük a terméket és hideg etilacetáttal óvatosan 50 mossuk. Az így kapott termék forró etilacetátból történő kétszeri átkristályosítás után 187— 16 25 188 -on bomlás közben olvad; [«]ó -36° (c = 2,01 metanolból). 55 A termék a vékonyrétegű kromatografálás során egységesnek mutatkozik, a benzol/etanol 7 : 3 rendszerben. Kimutatás: klór-módszer. d) l-'tL-izoleucil-L-szerilJ-S-tterc. butoxikarbonil)-hidrazin: 60 13,4 g 1(28,8 millimól) l-í(N-karbobenziloxi-L-izoleucil-iL-szeril)-2-(terc. butoxikarbonil)-hidrazint 300 ml metanolban oldunk és az ol- 65 datot palládiumos aktívszén katalizátor (10% Pd) jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátor kiszűrése után a metanolt vákuumban elpárologtatjuk. A kapott olajszerű maradékot éterrel, majd éter és petroléter elegyével ismételten kezeljük, az oldószert minden alkalommal ledesztillálva. Az így kapott porszerű maradékot azután etilacetáttal eldörzsöljük és leszűrjük. Tisztítás céljából a terméket acetonitrilből kétszer átkristályosítjuk. A tisztított termék 133— 134°-on olvad, 134°-tól kezdődően bomlik; ,26 [«]o -36,1° i(c = 1,99 metanolban). Kimutatás: nirihidrin-módszerrel. A vékonyrétegű kromatografálás során a termék egységesnek mutatkozik a benzol/etanol 8 : 2 rendszerben. e) lJ

(S-benzil-iN-tozil-L-císzteinil-L-tirozil-L-izoleucil-L-szeril)-2-'(terc. butoxikarboml)-rhidrazin: 2,22 g i(4,2 millimól) S-benzil-N-tozil-L-ciszteinil-L-tirozin [előállítva V. DuVigneaud, M. F. Bartlett és A. Jöhl, J. Am. Chem. Soc. 79, 5572 ,(1957) szerint] és 1,41 g (4,2 millimól) l-(L-izoleucil-L-szeril)-2^(terc. butoxikarbonil)-hidrazin 22 ml 1:1 arányú dimetilformamid/acetonitril eleggyel készített oldatát —10° hőmérsékletre hűtjük le, majd hozzáadunk 0,89 g (4,3 millimól) N,N'-diciklohexil-karbodiim:idet és az elegyet 52 óra hosszat keverjük —10° hőmérsékleten. A reakció során leválik a iN,N'-diciklohexil-karbamid és a védett tetrapeptid-hidrazid. A reakcióelegyhez ezután 70 ml jéghideg vizet adunk. A csapadékot leszűrjük és vízzel, majd 3%-os nátriumhidrogénkarbonát oldattal és végül ismét vízzel gondosan mossuk. A N,iN'-dT-ciklohexil-karbamid eltávolítása céljából a nyers terméket 8,3 ml dimetilformamiddal felvesszük! 2 óráig hagyjuk 0° hőmérsékleten állni, majd a karbamidot kiszűrjük, 1,5 ml dimetilformamiddal utánamossuk és a szüredékhez 50 ml acetonitrilt adunk. Ennek hatására a védett tetrapeptid-hidrazid kocsonyás alakban leválik. A terméket leszívatjuk, hideg acetonitrillel és éterrel mossuk, majd dimetilformamid és acetonitril elegyéből kétszer átkristályosítjuk. Az így kapott termék 227—i229°-on bomlás közben olvad; [«]D =—30,2° !(c = 1,96 piridinben). A termék a vékonyrétegű kromatografálás során egységesnek mutatkozik a metiletilkéton/ /piridin/víz 65 : 5 : 20, benzol/etanol 8 : 2 és n-butanol/piridin/jégecet/víz 90 : 60 :18 : 72 rendszerekben. Kimutatás: klór-módszerrel és Folin-módszerrel. f) S-benzil-N-tozil-L-ciszteinil-L-tirozil-HL-izoleucil-L-szerin-hidrazid: 0,506 g í(0,6 millimól) l-ffS-benzilnN-tozil-L-ciszteiml-íL-tirozil-L-izoleucil-!L-szeril)-2-(terc. butoxikarbonil)-hidrazint 10 ml hideg 90%-os trifluorecetsavban oldunk és az oldatot IV4 óra