151698. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új nonapeptidamid előállítására
151698 13 14 ismét egyszer átcsapjuk. Ily módon az S-védett pentapeptidamidot színtelen, higroszkópos por alakjában kapjuk; ezt a terméket azután közvetlenül felhasználjuk az e) alatt leírt módon előállított S,iN-védett tetrapepidaziddal való kapcsolásra, n) S-benzil-iN-tozil-L-ciszteinil-L-tirozil-L-izoleucil-L-szeril-Lr-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil-L-prolil-:L-izoleucil-glicinamid: Az e) alatt leírt módon előállított S^N-védett tetrapeptidazidot 35 ml —10° hőmérsékletre hűtött dimetilformamidban oldjuk, majd étihez az oldathoz hozzáadjuk 0,769 g i(''l,3 millimól) L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil-L-prolil-L-izoleucil-glicinamid [előállítva az m) alatt leírt módon[ és 0,18 ml J(1,3 millimól) trietilamin 5 ml dimetilformamiddal készített és ugyancsak —10° hőmérsékletre lehűtött oldatát. Az elegy hőmérsékletét —7° és —5° közé hagyjuk emelkedni, majd ezen a hőmérsékleten 22 óra tioszszat keverjük a reakcióelegyet. Ez idő elteltével az infravörös színképben a 4,75 mikronnál fellépő, az amid jelenlétére jellegzetes sáv már nem látható. Az N,S,S'-védett nonapeptidamidot 130 ml jeges víz óvatos hozzáadása útján lecsapjuk, leszűrjük, hideg vízzel, majd 0,5 n sósav oldattal, azután ismét vízzel, majd 3%-os nátriumhidrogénkarbonát oldattal, végül pedig újból vízzel mossuk és vákuumban foszforpentoxid felett megszárítjuk. Az így kapott termék 205°on zsugorodik és 211—217°-on olvad. Tisztítás céljából négy ízben átcsapjuk dimetilformamid és acetonitril 1 :6 arányú elegyéből, miközben minden alkalommal dimetilformamid és acetonitril 1 : 7 arányú,' metanol és acetonitril 1 : 5 arányú elegyével, majd acetonitrillel, etilacetáttal és éterrel mossuk. Az így tisztított termék 211°-on zsugorodik, majd 225,5—>228,5°-on bomlás közben olvad; [4D = —2-2,7° {c = 1,44 dimetilforrnamidban). o) SjS'-dehidro-iL-ciszteinil-L-tirozil-L-izoleucil-L-szeril-L-aszparaginil-L-ciszteinil-L-prolil-L-izoleucil-glicinamid !(Ser4 -Ile 8 ~oxitocin): 100 mg 1(0,767 millimól) N-tozil-S-benzil-L-ciszteinilHL-tiroziWL-izoleucil-'L-szeril-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil-IL-proril-L-izoleucil-glicinamidot 150 ml iflfém-nátrium felett desztillált) cseppfolyós ammóniában oldunk és az oldathoz addig adunk fém-nátriumot, míg a fellépő kék színeződés legalább 5 percig mégmarad. A nátrium feleslegét ammóniumklorid hozzáadásával elbontjuk, az ammóniát elpárologtatjuk és a maradékot vákuum-exszikkátorban tömény kénsav felett mentesítjük az ammónia utolsó maradványaitól is. A maradékot 200 ml jeges vízben oldjuk, az oldatot 2 n ecetsavval 6,6—6,8 pH-értékre állítjuk be és addig' vezetünk rajta keresztül légáramot, míg az 25 oldat negatív nitroprusszidnátrium-reakciót nem ad. Ezután a reakcióelegyet 2 n ecetsavval 4 pH értékre állítjuk, Hyflo-szűrőn leszűrjük és liofilizáljuk. A nyers terméket Craig-módszere 5 [L. C. Craig, Analytic. Chemistry, 22, 1346 (1950)] szerinti ellenáramú megosztással, szék. butanol — 0,017 n ecetsav oldat rendszerben tisztítjuk. A főfrakciő, amelynek megoszlási együtthatója 25° hőmérsékleten K = 0,53, izo-10 Iáit patkány-méhen kb. 130 NE/mg oxitocikus aktivitást mutat. 15 2. példa: a) l-i(l N-karbobenziloxi-L-szeril)-2H(terc. butoxikarbonil)^hidrazin. 20 3,59 g (15 millimól) N-karbobenziloxi-L-szerint [előállítva pl. S. Guttmann és R. A. Boissonnas, Helv. Chim. Acta 41, 1852 1(1958) vagy E. Baer és J. Maurukas, J. biol. Chem. 212, 25 (1955) előírása szerint] és 2,18 g .(,16,5 millimól) terc.butoxikarbonil-hidrazint [előállítva pl. L. A. Carpino, J. Am. Chem. Soc. 79, 98 és 4427 (1957) és L. A. Carpino, C. A. Ciza és B. A. Carpino, uo. 81, 955 1(1959) előírása szerint] 35 ml metanolban oldunk és ehhez az oldathoz 0° hőmér-30 sékleten 1 óra alatt hozzáadjuk 6,99 g '('1-6,5 millimól) l-ciklohexil-3-[2-morfolinil-(4)-etil]-karbodiimid-metil-p-toluolszulfonát 15 ml metanollal készített oldatát. A reakcióelegyet 20 óra hosszat hagyjuk 0° hőmérsékleten állni, majd a metanolt vákuumban ledesztilláljuk és a visszamaradó olajszerű terméket etilacetát-víz eleggyel felvesszük. Az etilacetátos fázist elkülönítjük, vízzel, majd 2 n. citromsav oldattal, vízzel, 5%-os nátriumhidrogénkarbonát oldattal és végül ismét vízzel gondosan mossuk, azután pedig nátriumszulfáton szárítjuk. Az etilacetátot vákuumban ledesztilláljuk, amikoris a termék olajszerű alakban visszamarad, ezt éterrel .. eldörzsölve kristályosodásra bírjuk. A nyers terméket azután etilacetát és hexán elegyéből átkristályosítjuk, az így kapott termék 99— 101°-on vagy 112—113°-on olvad l(polimorf módosulatok, oldatban az infravörös színképük 50 - azonos, optikai aktivitásuk szintén; a vékonyrétegű kromatografálás során is azonos módon 35 40 25 viselkednek). [a]D ban). -25,9° i(c = 2,11 metanol-55 A kapott termék hozama 2,95 g, ami 56%-os termelési hányadnak felel meg. A termék a vékonyrétegű kromatografálás során a benzol/aceton 6 : 4, metiletilketon/piridin/víz 65 : 5 : 20 és n-butanol/jégecet/víz 3:1:1 g0 rendszerekből nyerhető. Kimutatás: klór-módszer. Metanol helyett oldószerként acetonitril is használható; az l-ciklohexil-3-[2-morfolinil-(4)-etil]-karbodiimid N,öNF-diciklohexil-karbodiimid-65 del is helyettesíthető.
