151698. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új nonapeptidamid előállítására

ii oldunk, 1,1 ekvivalens vizes sósavat adunk az oldathoz, majd palládiumot aktívszén Í(10% Pd) jelenlétében 5 óra hosszat kezeljük hidrogénnel. A katalizátort ezután kiszűrjük és a reakcióelegyet vákuumban 35° hőmérsékleten bepároljuk. A kapott színtelen habszerű maradékot metanol és kloroform elegyéből egyszer, majd metanol és etilacetát elegyéből kétszer átkristályosítjuk. Az így kapott tripeptidamid-hidroklorid 214°-on bekövetkező zsugorodás után 215,5—218°-on bomlás közben olvad; [a]% = = —4<2,4q i(c = 2,1 95%-os etanolban). A bázis felszabadítása céljából a fenti hidrokloridot 50 ml metanolban oldjuk és az oldatot egy metanollal előzetesen kezelt, Oldalakban levő, 100 g Dowex—21K gyantával töltött ioncserélő-oszlopon át szűrjük. Az oszlopot összesen 400 ml metanollal utána mossuk és a klórtól mentes eluátumot vákuumban 30° hőmérsékleten szárazra bepároljuk. A tripeptidamid köteges tűkristályok alakjában marad vissza, op. 171,5—173°; '[«]?;' =—65,5° (ic = 2,02 jégecetben). A termék a vékonyréteg kromatografálás során egységesnek mutatkozik a n-butanol/j égecet/víz 3:1:1 és metiletilketon'piridin/víz 65 : 5 : 20 rendszerekben. Kimutatás: ninhidrinmódszer. A fenti tripeptidamidot már P. A. Jaquenaud és R. A. Boissonnas, Helv. Chim. Acta 44, 113 (1961) is előállították egy hasonló reakciósorozat útján, amely a fent leírt szintézistől abban különbözik, hogy a karbobehziloxi-csoportok lehasítását brómhidrogénsavval jégecetben hajtották végre és a iN-karbobenziloxi-prolin-p-nitro-fenilészter helyett vegyes N-karbobenziloxi-prolin-etoxihangyasav-anhidridet használtak, ily módon a kapott tripeptidamid olvadáspontja 118° volt, fajlagos forgatóképessége pedig [«]D = —63±1° i(c = 2 jégecetben). 1) N-karbobenziloxi-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinilj

L-prolil-L^izoleucil-glicinamid: A g) alatt leírt módon előállított N-karbobenziloxi-L-aszparaginil-S-benzil-i.-cisztein-azidot 150 ml hideg dimetilformamidban oldjuk és ezt az oldatot hozzáadjuk 4,264 g i(15 millimól) L-prolil-L-izoleucil-glicinamid [vö. k) alatt] és 2,1 ml (15 millimól) trietilamin 50 ml dimetilformamiddal készített oldatához. A reakcióélegyet 56 óra hosszat keverjük 0° és +3° közötti hőmérsékleten. Ez idő elteltével az infravörös színképben a 4,75 mikronnál fellépő azid-sáv már nem látható. A reakciótermék elkülönítése céljából a reakcióelegyet •—10° hőmérsékletre hűtjük, majd 750 ml jéghideg víz óvatos hozzáadásával a reakcióterméket kocsonyás tömeg alakjában lecsapjuk. A csapadékot leszívatjuk, hideg vízzel alaposan mossuk és vákuumban foszforpentoxid felett megszárítjuk. A szennyezések eltávolítása céljából a finoman porított nyers terméket 40—• 40 ml 4 :1 arányú acetonitril/metanol eleggyel alaposan eldörzsöljük három ízben, majd leszűr-5 jük. A terméket ezután dimetilformamid és acetonitril 1 :4 arányú elegyéből kétszer átkristályosítjuk. Az így kapott S,;

N-védett pentapeptidamid 233—235°-on bomlás közben olvad; 10 Mö =

—

51

'

3

° (

c

=

1>

03

dimetilformamidban), [«]y =—79,3° <c = 1,03 jégecetben). A termék a vékonyrétegű kromatografálás során egységesnek mutatkozik a n-butanol/j ég-15 ecet/víz

3:1:1, metiletilketon/piridin/víz 65:5:20 és metanol/kloroform 2 : 1 rendszerekben. Kimutatás : klór-módszer. Ugyanez a védett pentapeptidamid előállítható N-karbobenziloxi-L-aszparaginil-S-benzil-20 -L-cisztein [előállítva pl. R. A. Boissonnas, S. Guttmann, P. A. Jaquenoud és J. P. Waller, Helv. Chim. Acta 38, 1491 >(1955) szerint] és L-prolil-L-izoleucil-glicinamid kondenzációja útján is; ezt a kondenzációt dimetilformamid és acetonitril 1 :4,4 arányú elegyében, N,N'-diciklohexil-karbodiimid segítségével folytathatjuk le. m) C-terminális pentapeptidamid: 30 L-aszparaginil-S-benzil-iL-ciszteinil-L-prolil-L-izoleucil-gli cinamid: 2,01 g Í(j2,78 millimól) N-karbobenziloxi-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil-L-prolil-L-izoleucil-glicinamidot 12 ml 2 n brómhidrogénsavval kezelünk jégecetben. A karbobenziloxi-vegyület 40 perc alatt teljesen oldódik. Az oldatot 2V2 óra hosszat keverjük 20° hőmérsékleten, majd a 40 mélysárga színű oldathoz 35 ml absz. étert adunk, amikoris az S-védett pentapeptidamid hidrobromidja gyantaszerű tömeg alakjában leválik. A csapadék absz. éterrel való ismételt eldörzsölés hatására szemcséssé válik. Ekkor le-45 szűrjük, majd etanol és éter elegyéből kétszer átcsapjuk. Ugyanezt a hidrobromidot előállíthatjuk trifluorecetsavas közegben alkalmazott brómhidrogénsav segítségével is, míg ha csupán trifluor-5Q ecetsavat alkalmazunk a forrpontnak megfelelő hőmérsékleten, akkor a megfelelő trifluoracetát válik le. Az S-védett pentapeptidamid felszabadítása céljából 2,46 g (3,66 millimól) L-aszparaginil-S-55 -benzil-L-ciszteinil-L-prolil-L-izoleucil-glicmamid-hidrobromidot 30 ml metanolban oldunk és ezt az oldatot egy metanollal előzetesen kezelt, OH-alakban levő, 60 g Dowex—21K gyantával töltött ioncserélő oszlopon át szűrjük. A 60 szabad pentapeptidamidot 250 ml metanollal eluáljuk az oszlopról és a brómtól mentes eluá*tumot vákuumban, 30° hőmérsékleten, nedvesség kizárásával szárazra pároljuk be. A maradékot absz. etanol és absz, éter elegyéből egyes szer, majd aceton, etilacetát és éter elegyéből 6