151462. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rákellenes hatású antibiotikum előállítására
27 151462 28 , használási célra a legjobban megfelelő minőségű antibiotikumhoz jussunk. A fenti módon elkülönített 9.865 R,P. antibiotikumot azután három alkotórészére, a 13.057 R.P., 13.213 R.P. és 13.330 R.P. antibiotikumokra választhatjuk szét. Ez a szétválasztás a több összetevőt tartalmazó antibiotikumok szétválasztására már ismert klasszikus módszerekkel, mint különféle adszorbenseken történő kromatografálással és/vagy ellenáramú megosztással hajtható végre. Azt tapasztaltuk, hogy az ellenáramú megosztás előnyösebb módszer erre a célra, különösen abban az esetben, ha ezt az alábbi, csupán előnyös, de nem szükségszerű kiviteli módként említett módszerek valamelyikével .folytatjuk le: 1. Ha a 13.057 R.P. antibiotikumot elkülönítve kívánjuk megkapni, az ellenáramú megosztást a 9.865 R.P. antibiotikumból kiindulva, butanolt és 7—7,5 pH-értékű foszfát-puffért tartalmazó rendszerrel végezzük. 2. A 13.213 R.P. antibiotikum egymagában való kinyerése céljából a 9.865 R.P. antibiotikumot butanölból, etilacetátból és 4 pH-értékű puffefból álló rendszerrel vetjük alá ellenáramú megosztásnak. 3. Ha mindhárom alkotórészt külön akarjuk kinyerni, akkor a 9.865 R.P. antibiotikumból kiindulva két ellenáramú megosztást végzünk egymást követően; először kétféle klórozott alifás szénhidrogénből és 5,8 pH-értékű pufferoldatból álló rendszerrel, korlátozott számú átvitellel, amikor is két frakciót kapunk, az egyikben, á vizes fázisban, a 13.057 R.P. antibiotikumot, a 13.213 R.P. antibiotikummal szennyezve, a másik frakcióban, a szerves fázisban a 13.213 R.P. és 13.330 R.P. antibiotikumokat, a 13.057 R.P. antibiotikummal szenynyezve; azután az így kapott két frakciót külön-külön etilacetátból, metanolból és 5,5 pH-értékű foszfát-puffer-oldatból álló rendszerrel kezeljük, amikor is egyrészt a 13.057 R.P. antibiotikumot, másrészt egymástól elkülönítve a 13.213 R.P. és 13.330 R.P. antibiotikumokat kapjuk termékként. A fent említett különféle ellenáramú megosztási műveletek előtt vagy azokat követően különféle egyéb ismert, klasszikus tisztítási műveleteket is beiktathatunk az eljárásba; így elsősorban extrakciós és átkristályosítási műveletekkel tisztíthatjuk tovább a termékeket, hogy az említett három alkotórészt a szándékolt felhasználási célnak megfelelő tisztasági fokban nyerhessük ki. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik, megjegyzendő azonban, hogy a találmány köre nem korlátozódik ezekre a példákra. Az alábbiak során említett antibiotikus aktivitás-értékeket turbidimetriás adagolással, Klebsiella pneumoniae érzékeny .mikroorganizmusként való felhasználásával határoztuk meg, ismert aktivitású 9.865 R.P. antibiotikum-mintát használva összehasonlítási alapként. Az így kapott aktivitás*értékeket egységekben (E) fejeztük ki, szilárd termékek esetében 1 mg anyagra, oldatok esetében 1 cm3 oldatra vonatkoztatva; az egység a terméknek azt a legkisebb mennyiségét jelenti, amely 1 cm3 megfeji lelő kultúra-közegben oldva, meggátolja meghatározott körülmények között a Klebsiella pneumoniae mikroorganizmus fejlődését. 1. példa: 10 Egy 170 literes fermentorba az alábbi anyagokat adagoljuk be: kukoricalekvár 2,400 kg 15 szacharóz 3,600 kg kálciumkarbonát 0,900 kg ammóniumszulfát 0,240 kg vízzel feltöltve 100 literre 20 A fenti összetételű táptalaj pH-értéke 6,15. A táptalajt vízgőzbevezetéssel sterilizáljuk, 122 C° hőmérsékleten 40 percig. Lehűlés után a táptalaj térfogata 120 liter, pH-értéke 7,20. Ezt a táptalajt azután beoltjuk a Streptomyces 25 31.723 törzs Erlenmeyer-lombikban szaporított rázott kultúrájának 200 ml mennyiségével. A kultúrát 26—27 C° hőmérsékleten 27 óra hoszszat szaporítjuk keverés közben, steril levegővel folytatott szellőzéssel; ebben az állapotban 30 a kapott kultúra már alkalmas a termelő kultúra beoltására. A fenti módon kapott kultúrát inokulumként felhasználva, a termelő kultúrát 800 literes fermentorban szaporítjuk; a fermentorba először 35 az alábbi anyagokat visszük be: szójaliszt 20 kg cefre-sűrítmény 2,5 kg keményítő 10 kg 40 szójaolaj 2,5 liter nátriumklorid 5 kg vízzel feltöltve 465 literre. Az így kapott táptalaj pH-értékét 400 ml tö-45 meny nátronlúg hozzáadásával 7,20-ra állítjuk be. A táptalajt ezután vízgőzbevezetéssel 40 percig sterilizáljuk 120 C° hőmérsékletén. Lehűlés után a táptalaj térfogata 500 liter pH-értéke 6,75. Ezt a táptalajt oltjuk be a 170 50 literes fermentorban előzőleg szaporított inokulum-kultúra 50 literjével. A fermentációt 28 C° hőmérsékleten 67 óra hosszat folytatjuk keverés és steril levegővel történő szellőzés közben. A fermentációs közeg pH-értéke ekkor 55 7,40, térfogata 520 liter. A fermentációs közegben jelenlevő antibiotikum mennyisége 29 E/ml. 2. példa: 60 Az inokulum-kultúrát 170 literes fermentorban ugyanolyan körülmények között állítjuk elő, mint ahogyan az 1. példában leírtuk, a beoltást azonban a Streptomyces 8899 törzs Erlenmeyer-lombikban szaporított rázott kultúrá-C3 jának 200 ml mennyiségével végezzük. 14
