151462. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rákellenes hatású antibiotikum előállítására

151462 29 30 A termelő kultúrát 800 literes fermentorban, az 1. példában leírt összetételű táptalajjal tenyésztjük. A táptalaj pH-értékét 750 ml tömény nátronlúg hozzáadásával 8,10-re állítjuk be. A táptalajt azután vízgőzbevezetéssel 122 C° hőmérsékleten 40 percig sterilizáljuk. Lehűlés után a tápközeg térfogata 500 liter, pH-értéke 6,80. A táptalajt azután a 170 literes fermentorban nevelt inokulum-kultúra 75 literjével oltjuk be. A fermentációt 26—27 C° hőmérsékleten 67 óra hosszat folytatjuk, keverés és steril levegővel történő szellőzés közben. A fermentáció befejeztével a fermentációs közeg pH-értéke 7,40, térfogata 545 liter. A táptalajban jelenlevő antibiotikum mennyisége 9,1 E/ml. 3. példa: Az 1. példában leírt módon kapott fermentációs levet, amelynek mennyisége 520 liter és antibiotikum-tartalma 29 E/ml, egy keverővel felszerelt tartányba visszük be és pH-értékét tömény oxálsav-oldattal' 1,8-ra állítjuk be. A közeget ,1 óra hosszat keverjük, majd 20 kg szűrési segédanyagot adunk hozzá. Az elegyet szűrőprésen leszűrjük és a szűrőlepényt 100 s liter vízzel mossuk, amelynek pH-értékét előzőleg oxálsavval 2-re állítottuk be. A szüredékhez, amelynek térfogata 612 liter, 4,5 pH-érték eléréséig tömény nátronlúgoldatot adunk. Azután a szüredéket egy Amberlite IRC 50 ioncserélő gyanta (savas ciklusban) 20 literjét tartalmazó, 15,2 cm átmérőjű, 200 cm magas és 110 cm magasságban gyantaréteggel töltött oszlopra visszük. A gyantaágyon a szüredék alulról felfelé halad keresztül, 40 liter/óra áramlási sebességgel. Az oszlopot azután 100 liter vízzel mossuk, 50 liter/óra sebességgel, alulról felfelé haladó irányban, majd 75 liter vizes 10%-os metanol-oldattal felülről lefelé haladó irányban, 50. liter/óra sebességgel, másfél óra hosszat. A mosófolyadékokat kiselejtezzük és; az oszlopot azután az alábbi összetételű oldattal eluáljuk: 4. példa: nátriumklorid 10 g víz 100 ml metanollal feltöltve 1000 ml-re. Äz eluátum, amely az antibiotikum nagyobb részét tartalmazza, 100 liter térfogatú. Ezt 35 C° hőmérsékleten csökkentett nyomás alatt, 10 liter térfogatra töményítjük be. A kapott koncentrátumot 7,5 pH-értéken 2 X 5 liter kloroformmal extraháljuk. A kloroformos kivonatot kloroformos ecetsavoldat (10 :100 tf-arányban) 4 pH-értékre állítjuk be, majd csökkentett nyomás alatt, 30 C° hőmérsékleten 100 ml térfogatra töményítjük be. Az antibiotikumot 1 liter hexán hozzáadásával lecsapjuk, leszívatjuk, mossuk és megszárítjuk. Ily módon 9 g amorf vörös port kapunk, amelynek antibiotikum-tartalma 1,400 E/mg. 17,1 g fenti módon kapott (1. 3. példa) nyers terméket (amelynek antibiotikum-aktivitása 5 1530 E/mg) keverés közben oldunk 1,5 liter metilénklorid, 0,3 liter széntitraklorid és 1,8 liter víz keverékében. A pH-értéket azután 8 ml n sósavoldat hozzáadásával 3-ra állítjuk be. Dekantálássul történő szétválasztás után a vizes 10 fázist 7 liter metilcn kloriddal és 200 ml 0,1 n nátriumhidroxid-oldattal kezeljük, oly módon, hogy pH-értéke 7,5 legyen. Dekantálással elválasztjuk a. fázisokat és a vizes fázist 7,5 pH-értéken újból extraháljuk 3,5 liter metilénklo-15 riddal. A metilénkloridos kivonatokat egyesítjük és 100 ml térfogatra töményítjük be. 1 liter heptánt adunk a koncentrátumhoz, amikor is leválik a termék, ezt leszűrjük, mossuk és csökkentett nyomás alatt, 30 C° hőmérsékleten 20 szárítjuk. Ily módon 9,15 g 9.865 R.P. antibiotikumot kapunk, amorf vörös por alakjában; e termék antibiotikum-aktivitása 2,180 E/mg. 25 5. példa: Metilénkloridból, széntetrakloridból és 5,8 pjlértékű Mac Ilvaine tompítóoldatból (20 ml ilyen tompítóoldatot oly módon készítünk el, hogy 12,09 ml 0,2 mólos dinátriumhidrogénfoszfát-30 oldatot hozzáadunk 7,91 ml 0,1 mólos citromsavoldathoz;) 2:1:3 tf. arányú elegyet készítünk. Amikor ez az elegy egyensúlyba jut, a két fázist különválasztjuk. A két fázis 1—1 x literjének elegyében feloldunk 10 g 9.865 R.P. 35 antibiotikumot (előállítva a 4. példában leírt módon.; antibiotikum-tartalma 1750 E/mg). Ezt a rendszert ellenáramú megosztásnak vetjük alá, 5 literes edényekben, 6 átvitellel: a nehezebb fázist mozgó fázisként (szerves oldószer) 40 és a könnyebb (vizes) fázist álló fázisként alkalmazva; minden alkalommal 1—1 litert véve mindegyik fázisból. Az alsó fázisok elegyét („A" elegy) és a felső fázisok elegyét („B" elegy) az első négy edényből, valamint az alsó 45 fázisok elegyét („C" elegy) és a felső fázisok elegyét („D" elegy) a három utolsó edényből külön-külön elválasztjuk. A „B" elegyet 300 ml n nátriumhidroxidoldat hozzáadásával 7,5 pH-értékre állítjuk be, 50 majd sorban 4 liter, 2 liter, végül 1 lite* kloroformmal extraháljuk. A kloroformos kivonatokat és az „A" elegyet egyesítjük és csökkentett nyomás alatt az elegyet 700 ml térfogatra pároljuk be. A kapott koncentrátumot 2 X 350 55 ml vízzel mossuk 7,5 pH-értéken, a mosási anyalúgokat 2 X100 ml kloroformmal extraháljuk. A mosott koncentrátumot egyesítjük a kloroformos kivonatokkal és az egészet 70 ml térfogatra pároljuk be csökkentett nyomás alatt. 60 Azután 700 ml hexánt adunk a koncentrátumhoz, a képződött csapadékot leszűrjük, mossuk és csökkentett nyomás alatt 30 C° hőmérsékleten megszárítjuk. Ily módon 5,1 g termékfrakciót („Fi" frakció) kapunk, amely főként 65 13.057 R.P. antibiotikumot tartalmaz. 15