151218. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikumok előállítására
151218 13 előhívása jód-légkörben: sárgásbarna) két foltot mutat, amelyek az A-verrukarinnak ill. a B-verrukarinnak felelnek meg. További tisztítás céljából 6 g szilikagélen kromatografálunk. Eluálásra frakciónként 12 ml oldószert alkalmazunk. Az 1—5. frakciók (eluálószer: benzol, kloroform és kloroform-metanol 99 : 1) 3,6 mg amorf anyagot adnak (kiselejtezve). A 6. és 7. frakció (26 mg, eluálva 99 :1 kloroform-metanol eleggyel) éterből kristályosítva 8 mg nyers kristályos A-verrukarint ad (ez még tartalmaz B-verrukarint is). A 9. és 10. frakció (eluálva 99 :1 kloroform-metanol eleggyel) éterből kristályosítva 13 mg nyers kristályos E-verrukarint ad. A vékony rétegű kromatogramon az E-verrukarin jöd-légkörben kb. 10 perc elteltével vörösesibolya foltot ad. A 16—24. frakciók (eluálva 99:1 és 98:2 kloroform-metanol eleggyel) 15 mg amorf anyagot adnak (kiselejtezve). 2. példa:. Nyers A-verrukarin és B-verrukarin előállítása és kinyerése A Myrothecium verrucaria S 833 törzset egy 14 literes fermentorban (a New Brunswick Co., New Brunswick, USA, FS 314 típus-jelű gyártmánya) 10 liter 1. példa szerinti tápoldatban 6 napig tenyésztjük 27° hőmérsékleten, percenként 450 fordulatszámú keverővel keverve, szellőzés (10 liter levegő percenként) mellett. A kapott fermentációs lé 1 literjét kovaföld (Cellite) rétegen át leszűrjük és a kapott tiszta szüredéket kétszer extraháljuk 1—1 liter etilacetáttal. Az egyesített etilacetátos kivonatot 100 ml 2 n sósavoldattal .egyszer, majd 50—50 ml 2 n nátriumhidroxidoldattal kétszer és 50—50 ml vízzel kétszer mossuk, majd vákuumban bepároljuk. 277 mg barnára színezett nyers kivonatot kapunk, amely a vékony rétegű kromatogramon három foltot mutat, amelyek az A-verrukarinnak, B-verrukarinnak ill. E-verrukarinnak felelnek meg. Az egész kapott mennyiséget 14 g szilikagélen kromatografáljuk. Eluálásra frakcióként 30 ml oldószert alkalmazunk. Az 1—11. frakció (eluálószerek: benzol, metilénklorid 99:1 metilénklorid-metanol elegy) 127 mg amorf anyagot ad, amely vékony rétegű kromatografálással A-verrukarin és B-verrükarin mutatható ki. A 12. és 13. frakció (11 mg, eluálva 99:1 metilénklorid-metanol eleggyel) éterből kristályosítva 3,5 mg kristályos E-verrukarmt ad. A 14—22. frakció (eluálva 99:1 metilénklorid-metanol eleggyel) 30 mg amorf anyagot ad. A 6—11. és 14—17. frakciók termékét, valamint a 12. és 13. frakciók anyalúgját egyesítettük (125 mg) és a leírthoz hasonló módon újból krcmatografáltuk 13 g szilikagélen. A 99,5 : 0:5 arányú metilénkloridjmetanol eleggyel eluált frakciókat éterből átkristályosítva 3 mg nyers kristályos A-verrukarint kaptunk, amely még némi B-verrukarint is tartalmaz. 14 3. példa. Nyers A-verrukarin és B-verrukarin előállítása és kinyerése 5 Az S 833 törzset az 1. példában megadott körülmények között Weindling-féle tápoldatban [R. Weindling, Phytopathol. 24, 1155: R. Weindling, és A. Emerson, uo. 26, 1088: 25,0 g glükóz 10 (puriss., Ph. H. V.), valamint a következő anyagok analitikai tisztaságban: 2,0 g ammómumtartarát, 2,0' g primer kálium foszfát, 1,0 g magnéziumszulfát (-7H20), 1,0 mg vasszulfát (•7H2 0), 0,15 mg rézszulfát (-5H 2i O), 1,0 mg 15 cinkszulfát- (-7H 2Q), 1,0 mg mangánszulfát (•H2 0), 0,1 mg nátriummanganát, iontalanított vízzel 1,0 literre feltöltve] inkubáltatjuk. A ka' pott fermentációs lé 1 literjét a 2. példában leírthoz hasonló módon extraháljuk etilacetát-20 tal. Az egyesített kivonatot kétszer 50—50 ml 2 n nátriumhidroxidoldattal és kétszer 50—50 ml vízzel mossuk, majd vákuumban bepároljuk. 142 mg nyers kivonatot kapunk, ezt vékony rétegű kromatografálással vizsgálva há-25 rom foltot kapunk, amelyek közül kettő az A-verrukarinnak és a B-verrukarinnak felel meg. További tisztítás céljából a terméket 7 g szilikagélen kromatografáljuk, amikor is az eluálásra frakciónként 15 ml oldószert alkal-30 mázunk. Az 1—8. frakciók (eluálószerek: benzol, metilénklorid és 99:1 metilénklorid-metanol elegy) '54 mg amorf anyagot ad (kiselejtezve). A 9. frakció (8,5 mg, eluálva 99:1 metilénklorid-metanol eleggyel) éterből kristályo-35 .sítva 0,5 mg kristályos A-verrukarint ad (amely még B-verrukarint is tartalmaz). A 10—14. frakció (eluálva 99:1 metilénklorid-metanol eleggyel) és a 15—20. frakció (eluálva 98:2 metilénklorid-metanol eleggyel) 28 mg amorf 40 anyagot ad, amelyben vékony rétegű kromatografálással még az A-verrukarin és E-verrukarin további mennyiségei mutathatók ki. 45 4. példa: Nyers A-verrukarin és B-verrukarin előállítása és elkülönítése 50 Az S 118 törzset az 1. példában megadott körülmények között, de a 3. példa szerinti Weindling-féle tápoldatban inkubáltatjuk. Ezután 890 ml fermentációs levet a micélium eltávolítása céljából leszűrünk, a kapott tiszta 55 szüredéket kétszer kirázzuk 1—1 liter etilacetáttal, az egyesített kivonatot vízzel egyszer, majd 2 n nátriumhidroxidoldattal kétszer, azután pedig ismét vízzel kétszer mossuk és vákuumban bepároljuk. Ily módon 42,8 mg sár-60 gára színezett nyers terméket kapunk, amely az 1. példában leírthoz hasonló módon kivitelezett vékony rétegű kromatografálás során két foltot mutat, amelyek az A-verrukarinnak ill. B-verrukarinnak felelnek meg. További 65 tisztítás céljából a nyers terméket 25 g sziiika-
