151218. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikumok előállítására
151218 11 12 A-roridin 37-szarkóma 0,5 mg/kg 8 nap 18 6 0 Az A-verrukarin. B-verrukarin és A-roridin a sejtkultúrákra is határozott hatást fejtenek ki. Embrionális tyúk-fibroblaszt-kultúrákori az alábbi hatásokat tapasztaltuk: Az A-verrukarin 8 órai behatása esetén az ED50 -érték (az a koncentráció, amelynél a mitózisok fele megszakad) 0,0025 mog/ml. Ennél a koncentrációnál, valamint még ennél ezerszer nagyobb koncentrációknál is az osztódásban nem levő sejtek morfológiailag változatlanok maradnak, az osztódásban levő sejtek azonban, az A-verrukarin hatására szétesnek. A B-verrukarin hatása minőségileg hasonló az A-verrukarinéhoz, de valamivel gyengébb: ED50 = 0,01 mcg/ml. Az. A-roridin hatása minőségileg megegyezik az A-verrukarinéval; ED50 = 0,003 mcg/ml. A tumorsejtek (P—8l5 egér-masocytoma sejtek) szaporodásának in vitro gátlása az alábbi eredményeket mutatta: Ezek a tumorsejtek megfelelő tápoldatban 40 óra alatt a kezdeti sejtszám négy-ötszörösére szaporodnak. Az A-verrukarin esetében az ED5ű -érték (az a koncentráció, amely ezt a szaporodást 50%-osan gátolja) e sejtekkel szemben 0,0006 mcg/ml (azaz 1 : 1 600 000 000). A B-verrukarin esetében az ED50 -érték e sejtekkel szemben 0,003 mcg/ml, az A-roridin esetében pedig 0,001 mcg/ml. Az A-verrukarin, B-verrukarin és A-roridin toxikusságát különösen egéren vizsgáltuk. Az akut toxikusság DL50 -értékét a vizsgálandó hatóanyagok intravénás beadása útján vizsgáltuk: A-verrukarin DL50 i.v. 1,5 mg/kg B-verrukarin DL50 i.v. 7 mg/kg A-roridin DL50 i.v. 1 mg/kg Az A-verrukarin emellett vér-megbetegedések (pl. mieloid és limfatikus leukémia), valamint a nyirokrendszer megbetegedései (pl. Hodgkin-lymphogranuloma, lymphosarcoma) gyógykezelésére alkalmazható. Ha kutyákat az A-verrukarin 0,1 mg/kg adagjával naponta egyszer intravénásán kezelünk, akkor azt tapasztaljuk, hogy többszöri injekció után a leukociták száma a perifériás vérben erősen csökken. Pl. Kutya Kezelés előtt A 8900 leukocita/mm3 B 12500 leukocita/mm3 C 9300 leukocita/mm3 Kutya Kezelés után A 2900 leukocita/mm3 B 100 leukocita/mm3 C 5000 leukocita/mm3 Az A-verrukarin, B-verrukarin és A-roridin különféle gyógyszerkészítmények alakjában kerülhet gyógyászati alkalmazásra. Ezek a gyógyszerkészítmények az említett hatóanyagokat valamely enterális, parenterális vagy helyi alkalmazásra szolgáló szerves vagy szervetlen vivőanyaggal kombináltan tartalmazhatják. Ilyen vivőanyagként olyan anyagok jöhetnek tekintetbe, amelyek az új hatóanyagokkal nem lépnek reakcióba; ilyenek pl. a zselatin, tejcukor, keményítő, magnéziumsztearát, talkum, növényi olajok, benzilalkoholok, gumi, polialkilénglikolok, vazelin, koleszterin és más ismert gyógyszerészeti vivőanyagok. A gyógyszerkészítmények pl. tabletta, drazsé, por, krém, végbélkúp alakjában, vagy folyékony alakban, oldat, szuszpenzió vagy emulzió alakjában készíthetők el. Ezek a készítmények adott esetben sterilizálhatok és/vagy segédanyagokat, mint tartósító-, stabilizáló-, nedvesítő- 'Vagy emülgálószereket tartalmazhatnak. Kombinálhatók ezek a készítmények más, gyógyászati szempontból értékes anyagokkal is. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik; megjegyzendő azonban, hogy a találmány köre nincsen ezekre a példákra korlátozva. A példákban a hőmérsékleti adatok Celsius-fokokban értendők. Oldószerek esetében a megadott viszonyszámok a térfogatra vonatkoztatva értendők. 1. példa: Nyers A-verrukarin, B-verrukarin és E-verrukarin előállítása és elkülönítése 100 rázott kultúrát [500 ml-es Erlenmeyerlombikokban, 100—100 ml tápoldattal; tápoldatként a G. Luz, Phytopathol. Z. 7, 589 (1934) által módosított Richard-féle tápoldatot alkalmaztuk: 50,0 g glükóz (puriss., Ph. H. V.), valamint a következő analitikai minőségű sók: 10,0 g ammóniumnitrát, 5,0 g primer káliumfoszfát, 2,5 g magnéziumszulfát {-TH-jO;, 0,02 g . vas(III)-klorid, iontalanított vízzel 1,0 literre feltöltve] a Myrotheeium verrucaria S 833 törzs konidium - szuszpenziójával beoltunk. A kultúrákat 9 napig inkubáltatjuk 27° hőmérsékleten, amplitúdó-mozgású (frekvencia: 100 mozgás/perc) rázógépen, majd a micéliumot leszívatjuk, a tiszta szüredéket pedig kétszer kirázzuk 1—1 liter etilaeetáttal. A kivonatot 2 n sósavoldattal, 2 n nátriumhidroxidoldattal, majd vízzel a megadott sorrendben mossuk és vákuumban bepároljuk. 115 mg barnára színeződött nyers terméket kapunk, amely vékony rétegű kromatogramon (hordozó: szilikagél: futtatószer: kloroform-metanol 97:3; a foltok 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
