151214. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a béta-kortikotropin 1-28 és 1-21 fragmentjének szintézisére
o 151214 H-Val-Tyr-Pro-Asp(OR)-Gly-Ala-Glu(OR)-OR (IV) kondenzáljuk, majd az így nyert védett nonádekapeptidészter terminális védőcsoportjait a szokásos módon eltávolítjuk és a kapott (V) képletű nonadekapeptidet H-Gly-Lys(tos)~Pro-Val-Gly-Lys(tos)-Lys(tos)-Arg-Arg-P.ro-Val-Lys(tos)-Val-Tyr-Pro-Asp(ÖH)-Gly-Ala-Glu(OH)-OH (V) — célszerűen az önmagában ismert azoidos módszerrel — az alábbi (VI) képletű N-terminálisan védett noiiapeptidhidraziddal Z-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-NHNH2 (VI) kapcsoljuk, majd az így nyert védett oktakozapeptidről a védőcsoportokat ismert módon eltávolítjuk. A fenti képletekben Z valamely, az aminocsoport védelmére alkalmas csoportot, előnyösen benziloxikarbonil-esaportot, míg R alkilcsoportot, előnyösen etilcsoportot képvisel, „tos" pedig p-toluolszulfoniloxi-csoportot jelent. Hasonló módon állítható elő a találmány érielmében a (II) képletű heneikozapeptid is; ebből a célból a (VI) képletű védett nonapeptidhidrazidot kapcsoljuk —• célszerűen ugyancsak az azidos módszer segítségével — a terminális aminocsoportján nem védett (Hl/a) képletű dodekapeptiddel H-Gly-Lys(tos)~Pro-Val-Gly~Lys(to3)-Lys(tos)-Arg-Arg-Pro-Val-Lys(tos) <III/a) majd a terminális amino- ill. karboxilcsopor. tok védőcsoportjait á szokásos módon eltávolítjuk. A fenti eljárás a peptidkémiában ismert elvek által megszabott határokon belül variálható is; eljárhatunk pl. oly módon (I) oktakozapeptid előállítása .során, hogy először a (II) képletű heneikozapeptidet állítjuk elő és azután ezt kapcsoljuk a (IV) képletű heptapeptidészterrel. Célszerűbb azonban a peptidkémiában szokásos módon mindig az N-terminális szekvenciarész bevitelével befejezni a szintézist. A találmány szerinti eljárás kiinduló anyagaiként felhasználásra kerülő (III) ill. (III/a), (IV), (V) es (VI) peptidek előállítását korábbi szabadalmaink (150 736, 150737 és 150 738 lajstromszámú szabadalmak) ismertetik. A találmány szerinti eljárással előállított (I) ill. (II) képletű szintetikus polipeptidek megfelelő tisztítás után gyógyászati célokra használhatók fel. Ezáltal lehetőség nyílik olyan, a gyógyászatban igen nagy jelentőségű kortikotrop hatású készítmények előállítására, amelyek a hipofízisből előállított kortikotrop készítmények tisztaságát sokszorosan felülmúlják és így mentesek a természetes anyagokból nyert készítmények kellemetlen mellékhatásaitól. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik. 1 példa: A 10'—28 szekvencia előállítása a) Z-Gly-Ly.s(tos)-Pro-Val-Gly-Lys-Lys(tos)-5 -Arg-Arg-Pro-Val-Lys(tos)-Val-Tyr-Pro--Asp(OEt)-Gly-Ala~Glu(OEt)-OEt • 2HC1 10,0 ml piridinben 0,98 g (1,13 millimól) H-Val-Tyr-Pro-Asp(OEt)-Gly-Ala-Glu(OEt)-OEt-HCl-t és 2,17 g (1,0 millimól) Z-Gly-Lys-10 -(tos)-Pro-Val-Gly-Lys(tos)-Lysi(tos)-Arg-Arg-Pro-Val-Lys(tos)-OH-2HCl~t oldunk fel és 0,16 ml (1,14 millimól) trietil amint, majd 0 C" körüli hőmérsékletre hűtve 0,41 g (2,{0 millimól) dieiklohexil-karbodiimidet adunk hozzá. A re-15 akcióelegyet jégszekrényben hagyjuk állni 48 órán át. A reakció végén 3—5 csepp 50%-os ecetsavval a nem reagált dieiklohexil-karbodiimidet elbontjuk és a reakcióelegyet bepároljuk. A 20 párlási maradékot 6'0%-os acetonban szuszpendáljuk, a diciklohexilkarbamidot kiszűrjük és a szürletet bepároljuk. A párlási maradékot jeges vízzel eldörzsöljük, centrifugáljuk, vízzel mossuk, szárítjuk. 2,7 g (9'0,5%) nyers védett 25 , His nonadekapeptidesztert kapunK. E •, „ 0,61. CissHjoiOasNfflS*^ (2989,37) számított: S 4,3; Cl 2,35 talált: S 4,5; Cl 2,20 30 b) Z-Gly-Lys(tos)-Pro-Val-Gly-Lys(tos)-Lys'(tos)-Arg-Arg-Pro-Val-Lys(tos)-Val-Ty r-P ro-As p(OH)-Gly-Ala-Glu(OH)-OH 35 Az a) alatt leírt nyers védett nonadekapeptidészter-dihidrokloridból — mely 0,13 g diciklohexilkarbamidot tartalmaz — 2,7 g-t feloldunk 3,9 ml metanol és 4,7 ml 2N nátronlúg elegy ében és három órán át szobahőmér-40 sékleten állni hagyjuk, majd G—4 . jelzésű üvegszűrőn szűrjük. A szűrletet 0,46 ml jégecet hozzáadásával semlegesítjük, bepároljuk. A maradékot vízzel eldörzsöljük, centrifugáljuk, vízzel mossuk és szárítjuk. 1,9 g (78%) 45 His védett nonadekapeptidet kapunk. E,« 0,62. c) H-Gly-Lys(tos)-Pro-Val-Gly~Lys(tos)-Lys(tos)-Arg-Arg-Pro-Val-Lys(tos)~ 50 -Val-Tyr-Pro~Asp(OH)-Gly-Ala-Glu(OH)-OH Egy csepp sósav jelenlétében 6 ml dioxánban szuszpendált 1,8 g BaS04 /PdO katalizátort hid-55 rogénezünk, majd 1,6 g (0,565 millimól) b) alatt leírt védett nonadekapeptidet adunk hozzá 10 ml 70%-os vizes dioxánban oldva. Tíz óra hidrogénezés után a katalizátort, kiszűrjük és a szűrletet bepároljuk. A párlási maradékot 60 acetonnal eldörzsöljük és levegőn szárítjuk. , ^ ffi s 1,22 g (80%) nonadekapeptidet nyerünk. Ej^ 0,65. [K.]D —29 (c= 5; dimetiiformamidban). 65 Ci2iH,8i033N2 gS4-HCl-3H 2 0-2dioxán o
