151046. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikus hatású ciklopenteno-polihidro-fenantrén származékok előállítására

151046 A fenti táblázatban az eredet helye megjelölésben szereplő CBS jelentése Centralalbureau voor Schimmelcultures, Baarn, Hollandia, ahonnan az említett kultúrák a megadott néven beszerezhetők. A fent megadott táptalajok összetétele a következő: (I) Saborauds táptalaj: pepton 10 g glukóz 20 g desztillált víz 1 liter autoklávozás előtti pH-érték 6,0 10 6 4. táblázat Besugárzási idő Túlélési mp-ben százalék 10 50 20 4,3 30 0,035 40 0,006 50 0,002 (II) Staley táptalaj: glicerin 7,'5 g kukoricalekvár 50% 2,5 g magnéziumszulfát 50 mg primer káliumfoszfát 60 mg nátriumklorid 4 g vas(II)szulfát 5 mg rézszulfát 4 mg glukóz 10 g csapvíz 1 lite 60 g 4,5 ff 15,84 g 14,28 g 33,36 g 6 g 38,4 mg 6,6 mg 53,4 mg 9 mg 30 120 ml 30 g 6 liter autoklávozás előtti pH-érték 7,0 (III) Alábbi összetételű táptalaj: glukóz aszparagin ammóniumszulf át primer káliumfoszfát szekunder káliumfoszfát magnéziumfoszfát rézszulfát vas(II)szulfát mangánszulfát zinkszulfát élesztő kivonat kukoricalekvár 50%, kréta desztillált víz A találmány szerinti eljárásban szereplő genus mutánsait a gombák spóráira ható bármely ismert mutációt okozó eljárással nyerhetjük. Így például valamely spóra szuszpenziót ionizáló vagy nem ionizáló sugarakkal besugározhatjuk, vagy a spórákat génmutációt okozó vegyszerek — mint pl. dietilszulfát vagy mustár-gáz — hatásának tesszük ki. Ügy találtuk azonban, hogy a gombák mutációját igen előnyösen eszközölhetjük oly módon, hogy a spóra szuszpenziót ibolyántúli fénnyel olyan időtartamig besugározzuk, mely 0,005%—2,0% túlélési százalékot biztosít. Egy kísérletben, melyben a CephalosporinTM lamellaecola F. E. Smith—F. E. Smith spóra szuszpenzióját ibolyántúli sugarakkal sugároztuk be különösen megfelelő mutánst nyertünk. A fenti kísérletben megállapítottuk a túlélési százalék és a besugárzási idő közötti viszonyt, melyet a következő 4. táblázat mutat: 15 . A szuszpenzió besugározása után a spórákat agarlemezre leoltottuk, és a kifejlődött megfelelő számú törzset elkülönítettük, alaposabban megvizsgáltuk a növekedéshez szükséges igényeket és a fuzidsavtermelő képességet. 20 Ezután az eljárás után a fent említett különösen megfelelő mutánst az előzőleg 30 mp-ig besugárzott spóra szuszpenziótól elkülönítettük. Az említett mutánst Cl-ú 499-cel jelöltük, és ezt a jelzést a Commonwealth Mycological 25 Institute, Surrey, Anglia is fenntartotta. A növekedés mértéke, a spórázás és szín tekintetében a Cl-ú 499 az eredeti törzsre emiékeztet, azonban ez utóbbival ellentétben táptalajának alfa-amino-vajsavat, vagy izoleucint 30 kell tartalmaznia. A fent említett valamelyik táptalajon tenyésztve a Cl-ú 499 háromszor, négyszer annyi fuzidsavat termel, mint az eredeti törzs. A fuzidsav üzemi előállításaira különösen a 35 Cephalosporium lamellaecola F. E. Smith— F. E, Smith gomba és annak mutánsai bizonyultak legmegfelelőbbnek, azonban a találmány nem korlátozódik csak ezeknek a mikroorganizmusoknak használatára. 40 A találmány szerinti eljárással a Cephalosporium nemzetség fuzidsavat-termelő gombafaját aerob feltételek mellett szénhidrátot, nitrogénforrást, megfelelő mennyiségű szervetlen sókat, és más, a gomba táplálkozásához s'zük-45 séges anyagokat tartalmazó, vizes táptalajon tenyésztjük, és a fermentációt addig folytatjuk, míg az említett oldat jelentős antibiotikus aktivitást nyer, majd az ily módon keletkezett fuzidsavat kinyerjük, töményítjük és tiszta 50 alakban elkülönítjük, vagy ismert reakciók segítségével valamely sójává alakítjuk át. A fuzidsav-termelés mértékének a fermentáció során történő meghatározása a kultúra szüredék aktivitásának rutin értékelésével tör-55 ténik, mely célra az agar-lemezes módszer alkalmazható teszt mikroorganizmusként pl. Staphylococcus aureus-t használva. Az optimális fuzidsav kitermelést 80 és 130 óra között, 20° és 30° közötti — előnyösen 60 24° és 28° közötti — hőmérsékleten nyerjük. A hőmérséklet fent említett határai azonban nem jelentenek korlátozást, mivel az előnyös kitermeléshez szükséges idő az alkalmazott műszaki berendezésektől — fermentor méret, 65 alkalmazott keverő — is függ.