150875. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 5'-mononukleotidek előállítására
4 150.875 nem alakult nukleinsavat eltávolítsuk. Ezután az TJV adszorpciót spektrofotométerben ellenőrző próbával összehasonlítva mérjük. A P2 0 5 meghatározás spektrofotométerrel, M. Hockstein és P. N. Herron módszerével történik, Anal. Chemistry, 23 (1951) 1500. Az alábbi példák a találmány szerinti eljárást közelebbről megvilágítják. Ezekben a növényi anyagokból előállított extraktumokat rövid ideig melegítjük, majd lehűtjük. Valamely növényi anyagból álló extrakt előállítására, például tisztított árpakorpa csírából úgy járunk el, hogy 10 súlyrész növényi anyagot 100 súlyrész vízbe szuszpendálunk. Ezután két óra hosszat szobahőmérsékleten kevexjük, majd centrifugáljuk. Az extraktum pH-értéke ezután 5—6, és nátronlúggal vagy ecetsavval a kívánt pH-órtékre állítjuk be. Ezt követően a vizsgálandó hőmérsékleten és időtartam alatt vízfürdőben melegítjük. A hőkezelés után lehűtjük és a pH-értéket 8-ra állítjuk be. A hasításhoz a fentiek szerint kapott árpakorpa extraktum 15 térfogatrészét, vagy más növényi anyag, például búzaolaj csíra extraktum hasonló mennyiségét 10 térfogatrész nátriumnukieinátoldattal (nukleinsavra vonatkoztatva 2%-os) és 12 térfogatrész 0,1 8 pH-értékű trisz-pufferoldattal toluol hozzáadása közben összekeverjük. A hozzátartozó ellenőrző vizsgálatokban a nukleinsavoldatot 10 térfogatrész vízzel helyettesítjük. Az enzimatikus hasítás időtartama 37 C°-on mintegy 20 óra. Az eredményeket az alábbi II. táblázat 5. és fi. oszlopaiban tüntetjük fel. A hasítás lefutásának meghatározása az I. táblázat szerinti módon történik. Oszlop Példa: 10 11 12 13 14 Extraháló anyag: tisztított árpakorpa csírák tisztított árpakorpa csírák tisztított árpakorpa csírák búzaolaj csírák búzaolaj csírák II. Táblázat 2 3 Az extraktum előkezelése Meli egítés HőmérTartam séklet percben C 55 20 65 20 65 15 65 20 65 15 Nukleinsav iH nukleinsav P2 O 5 hasítás lehasítás % % 4 81 2,0 5 87 1,6 6 92 2,3 5 78 5,3 6 84 6,1 Az alábbi III. táblázatban pedig olyan példákat közlünk, amelyeknél a növényi anyagok extraktumát nehézfémsók jelenlétében melegítéssel kezeltük. 15. példa: a) Csírakivonat előállítása: 10 súlyrész tisztított árpakorpacsírát és 100 térfogatrész vizet az extrakció kezdetekor nátronlúggal 8,0 pH-értékre állítunk be és két óra hosszat szobahőmérsékleten kavarjuk, majd centrifugáljuk. Az extráktumot nátronlúggal vagy ecetsavval a kívánt pH-értékre állítjuk be. Ezután a kívánt molaritás eléréséhez szükséges mennyiségű nehézfémsó oldatot adunk hozzá. Ezt követően a hőkezelést a vizsgálandó hőmérsékleten és időtartamokon vízfürdőben végezzük. A hőkezelés után hűtünk és az így előkezelt extraktum pli-értékét ismét 8,0-ra állítjuk be (lásd az alábbi III. táblázat 1—6. oszlopait). b) Hasítás: 3 térfogatrész a) szerint előállított árpakorpacsíra kivonatot vagy más növények, például búzaolaj csíra kivonatát 2 térfogatrász nátriumnukleinátoldattal (1,687%-os, nukleinsavra vonatkoztatva) és 3 térfogatrész 0,1 mólos 8,0 pH-értékű trisz-pufferrel toluol hozzáadása közben elegyítjük. A hozzátartozó ellenőrző vizsgálatokban a nukleinsavoldatot 2 térfogatrész vízzel helyettesítjük. Az enzimatikus hasítás időtartama 37 C°-on mintegy 20 óra. Az eredményeket az alábbi III, táblázat 7. és 8. oszlopaiban tüntetjük fel. A hasítás lefutásának meghatározását az 1. táblázatnál megadott módon végezzük. III. Táblázat Kísérletek különféle sókkal, f ókoncentrációkkal és pH-értékekkel Oszlop 1 2 3 4 5 6 7 8 Extrahált anyag Az extraktum előkezelése Nukleinsav Példa: Extrahált anyag Fémsó Fajta Melegítés Hőmérkonc. séklet mol C° Tartam percben pH-érték nukleinsav hasítás % P2 0 5 lehasítás % 15 16 tisztított árpakorpa tisztított árpakorpa csíra csíra CuCl2 CuCl2 0,002 65 0,0002 65 20 20 5 5 87 91 11 4
