150474. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nagy tisztaságú neomycin sók előállítására
2 150.474 dossággal gyűjtött frakciók esetén sok felesleges ammóniumhidroxid nem szennyezi az antibiotikumtartalimú frakciókat, ennek folytán sósavas pH-állítás után pH 3! —3,5 mellett az oldat aktív szénen színteleníthető, majd neutrálisán végzett bepárlás után a neomycin—HCl acetonnal kicsapható. A nyert csapadék kenőcsös, ezért metanollal újra felvéve a második acetonos kies-apás szükséges, melynek során már a minőségi követelményeknek megfelelő neomycin—HCl nyerhető. Ezen lépésnél az esetleg jelenlevő NH4CI egyenlő térfogatú acetonnal való elegyítéskor még oldatában marad és csak az aceton nagyobb feleslegének hatására válik ki. A nyert neomycin—HCl átalakítható szulfáttá metanolos oldatban dietilaminszulfáttal vagy a neomycin—HCl első kicsapását követő metanolos oldásnál is elvégezhető a szulfáttá való átalakítás. Mint a példákban látható, a feldolgozás hatásfoka igen jó és a veszteségek lépésenként nagyon alacsonyak. 1. példa: Streptomyces flavoalibus burgonyás agáron tenyésztett spóráival oltunk 100 literes inokulumkészüléket, amelyben az alábbi összetételű táptalaj van: 6 literes frakciókat veszünk. A frakciók hatóanyagtartalma a következő: keményítő szójaliszt kükoricalekvár NaCl CaC03 pálmaolaj 0,2% 0,3% 0,5% 0.2% 48 óra múlva a 28°-on növesztett tenyészet átoltható egy 1000 literes fermantorba, amelynek táptalaj összetétele az alábbi: keményítő szójaliszt kükoricalekvár NaCl CaC03 pálma olaj kazein 3 % 2 % 0,2%, 0,3% 0,5% 0,2% 0,1% A fermentáció 2;8° -on keverte-tve és levegőztetve 1,500 E/ml értéket ér el. A fermentáció befejezése után oxálsavval a pH-értéket 3-ra állítjuk, gyorsan felmelegítjük 100 C°-ra, majd a hűtést ráadva 70—80 C°-on megkezdjük a micélium szűrését. A szűrlelt pH-ját ezután 10 n nátriumhidroxiddal keverés köziben 7—8 közé állítjuk, majd 10 liter ammónium ciklusú Amfoerlite IRC—50 gyantát keverünk a szűrt lébe. A gyantán való megkötés után a fermentléiben 150 E/ml hatóanyag marad, a gyantán tehát 1148 millió E ossz hatóanyag van megkötve. A kimosott gyanta eluálását megfelelő oszlopba töltve ammónia oldattal végezzük, melyet úgy készítünk, hogy 0,3 tf. 26—28%-os koncentrált ammónia oldatot 9,7 tf. vízzel hígítunk. Az eluálás üteme általában 3—4,5 liter lefolyó oldat óránként. Az eluá- -tumot akkor kezdjük gyűjteni, aimikor a lefolyó oldat pH-ja 8—9 között van és ezután általában 1. frakció 6 liter 2. frakció 6 liter 3. frakció 6 liter 4. frakció-6 liter 5. frakció 6 liter 6. frakció 6 liter 7. frakció 6 liter 8. frakció 6 liter 9. frakció 6 liter 2,200 E/ml 5,400 E/ml 24,000 E/ml 41,000 E/ml 48,000 E/ml 39,000 E/ml 23,000 E/ml 5,800 E/ml 2,300 E/ml Az 1., 2. és 8., 9. frakcióban összesen 94,2 millió E anyag van, melyet elvetettünk és a 3—7. frakciókban levő 1,050 millió E anyagot dolgoztunk fel tovább, össztérfogat 30 liter, hatóanyagtartalom 35,000 E/ml. Az egyesített eluátumot ezután vákuum gyorsbepárló készülékein 2—3 literre szűkítjük be. Bepárlás közben a hatóanyag nem károsodik. Ezután az oldatot koncentrált sósavval 3—4 pH-ig savanyítjuk, majd. 1000 g szénnel forrásig hevítve derítjük. A szenezett szűrlet színe enyhén szalmasárga. A szén a hatóanyag 20%-át megköti, amit 2.5 liter 3-as pH-jú sósavas vízzel való mosással 50%-ban visszakapunk. A szenezett szűrletet ezután 20 liter acetonba öntjük, ekkor a hatóanyag klórhidrátja először fehér felhő, majd összeálló, szilárdulásra hajlamos olaj alakjában kivált. A felülúszó folyadékot dekan-táljuk és a maradék olajat több részletben friss acetonhan addig kezeljük, míg az teljesen vízmentes és megszilárdul. Az utolsó aceton részlet tökéletes le-öntése után a maradék hatóanyagot 30 liter 3-as pH-jú sósavas metanolban vesszük fel, majd 30 liter acetonnal csapjuk ki erős keverés közben. A szűrt és megszárított késztermék súlya 1270 g, hatóanyagtartalma 700 E/mg, ami megfelel 900 g neomycin bázisnak. 2. példa: Az előző példa szerint nyert 30 liter eluátumot koncentrált sósavval pH 3-ra állítjuk, majd 1 kg szénnel felforralva derítjük. A derített oldat víztiszta, a szénen megkötött aktivitás az ossz aktivitás 20%-a, anii 15 liter 3-^as pH-jú sósavas vízzel való mosással 50%-lban visszanyerhető. Az így nyert oldatot gyorsfoepárlón 2—3 literre pároljuk be, majd. 20 liter acetonba csurgatva kicsapjuk. A lassan megszilárduló anyagot acetonnal vízmentesítjük, majd 30 liter 3—4-es pH-jú sósavas metanolban oldva 30 liter acetonnal erős keverés köziben kicsapjuk. Mivel a bepárlás közben színeződés lép fel, a metanolos oldatot kicsapás előtt 500 g szénnel derítjük. Az acetonnal kicsapott termék súlya 1270 g, hatóanyagtartalma 710 E/mg. 3. példa: A 2. példa szerint előállított 3—4-es pH-ji'i sósavas ímetanolos oldathoz szenes derítés után 900 g dietilaminszulfát tömény (kfo. 65%-os) metanolos oldatát csurgatjuk hozzá részletekben állandó keverés közben, a metanolos oldatból a neomycinszulfát fehér pelyhes csapadék alakjában kiválik. A kicsapás teljességéről úgy győződünk
