150141. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy eddig ismeretlen polipeptid előállítására

153.141 3 egy oly elegybe, amelyet frissen állítottunk elő oly módon, hogy 45 g N-karbobenzoxi-L-fenilalanin és 21 mi trietilamin 750 ml tetrahidrofuránnal készített oldatához —10° hőmérsékleten 14,5 ml klórhangyasav-etilésztert adunk. A fenti elegyet éjjelen át 20° hőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuum alatt bepároljuk, a maradékot 500 ml etilacetátban oldjuk, az oldatot híg sósavval, majd híg amimóniumhidroxid-oldattal mossuk és nátríumszulfáton szárítjuk. Ezután az oldatot néhány óra hosszat —5° hőmérsékleten hagyjuk állni és a kivált 56 g N-karbobenzoxi-L-fenilalamil-nitro-L-arginin-p-nitro-benzilésztert (op. 174°) leszűrjük és brómhidrogénsav jégecettel készített 2,2 n oldatának 550 ml-jében oldjuk. Az oldatot 20 percig hagyjuk 20° hőmérsékleten állni, majd vákuum alatt bepároljuk, 3000 ml etilétert adunk hozzá és a kristályosított maradékot (op. 175°) 150 ml kloroform és 19 ml trietilamin elegyében oldjuk. Az oldatot beleöntjük egy oly frissen készített elegybe, amelyet 23 g N-karbobenzoxi-L-prolin és 13 ml trietilamin 150 ml kloroformmal készített oldatának —10° hőmérsékleten 9,0 ml klórhaingyasav-etilészterrel való elegyítése útján állítottunk elő. A fenti módon kapott elegyet 3 óra hosszat hagyjuk 20° hőmérsékleten állni, majd vákuum alatt bepároljuk, etilacetátban oldjuk a maradékot, az oldatot híg sósavval, majd híg ammóniumhidroxid-oldattal mossuk, nátriumszulfáton szárítjuk, vákuum alatt bepároljuk és a maradékhoz etilétert adunk. Ily módon 49 g tripeptidésztert (op. 115°) kapunk, amelyet ezután brómhidrogénsav jégecettel készített 2,2 n oldatának 450 mijében oldunk. Az oldatot 20 percig hagyjuk 20° hőmérsékleten állni, majd vákuum alatt bepároljuk, a maradékhoz etilétert adunk, majd 450 ml etilacetát, 225 ml acetonitrii és 150 ml telített vizes káliumkarbonátoldat keverékében oldjuk. A szerves oldószeres fázist különválasztjuk, nátriumszulfáton szárítjuk és vákuum alatt bepároljuk. A maradékot 300 ml dimetilformaimidban oldjuk és az oldathoz 26,1 g N-karbobenzoxi-L-fenilalanil-L-szeril-azidot adunk. Az elegyet 2 napig hagyjuk állni 0° hőmérsékleten, majd vákuum alatt bepároljuk, étilétert adunk a maradékhoz és izopropanolból átkristályosítjuk. A kapott pentapeptidet 500 ml trifluorecetsavban oldjuk. Az oldatot 0° hőmérsékleten brómhidragénsavval telítjük, 1 óra hosszat hagyjuk 0°-on állni, majd vákuum alatt bepároljuk. A maradékhoz etilétert adunk, 300 ml dimetilformaimid és 300 ml etilacetát elegyében oldjuk, az oldatot 50 ml telített vizes káliumkarbonátoldattal kirázzuk, a szerves fázist nátriumszulfáton szárítjuk és vákuum alatt bepároljuk. Etiléter hozzáadása után 37 g L-fenilalanil-L-szeril-L-prolil-L-fenilalanil-initro-L-airiginin-p-niüwbeinzilésztert kapunk. e) L-arginil-L-prolil-L-prolil-'glicil-L-fenilalanil-L-tszeril-L-proiil-L-fenilalanil-L-arginiin. 30 g N-karbobenzoxi-nitro-L-arginil-L-prolü-L-prolil-glicint, 37 g L-fenilalanil-L-szeril-L-prolil-L-fenilalanil-initro-L-argiínin-pHnitro-beniZilésztert és 12 g diciklohexil^karbodiiimidet —10° hőmérsékleten oldunk 300 ml dimetilformamid és 100 ml acetonitrii elegyében. Az oldatot 20° hőmérsékleten éjjelen át állni hagyjuk, majd leszűrjük, vákuum alatt bepároljuk és a maradékot ÍO'OO ml forrásban levő etilacetátban szuszpendáljuk. Lehűlés után 55 g védett nonapeptidet kapunk, amelyet feloldunk 750 ml jégecet, 100 ml 2 n eósavoldat és 650 mi víz elegyében. Az oldatot 24 óra hosszat hidrogénezzük légköri nyomás alatt, palládiumkatalizátor (Van Orden és Smith, J. bioi. Chemistry. 208, 751 [1954] szerint) jelenlétéiben. A katalizátort kiszűrjük, a szüredéket vákuum alatt bepároljuk, a maradékot pedig izopropanol/víz/etiléter elegyből átkristályosítjuk. Ily módon 34 g L-arginil-L-prolil-L-prolil-glicil-L-fenilalainll-L-'Szeril-L-prolil-L-fenilalanil-L-argiinin-dihidrokloridot kapunk. A nonapeptid izoelektromos pontja 10,5. Savas, hidrolízis útján e termékből arginint, prolint, glicint, fenilalanint és szerint kapunk, 2:3:1:2:1 arányban. 2. példa: 30,2 g N-karbobenzoxi-nitro-L-arginil-L-prolil-L-prolil-glicint és 7,0 ml trietilamint 500 ml dioxánban oldunk —10° hőmérsékleten, 4,8 ml klórhangyasav-etilésztert adunk hozzá, majd 10 perc múlva 32,6 g L-fenilalanil-L-szeril-L-prolil-L-fenilalanil-L-arginint (előállítva pl. N-karbobenzoxi-L-fenilalanil-L-szeril-L-prolil-L-fenilal:anil-nitro-L-arginin-p-nitro-beinzilészter hidrogénezése útján) adunk 200 ml víz és 7 ml trietilamin elegyében oldva a fenti elegyhez. A reakrióelegyet 5 óra hosszat keverjük 20° hőmérsékleten, majd bepároljuk, a maradékot vízzel, híg ecetsavval és metiletilketonnal mossuk, majd 750 ml jégecet, 100 ml 2 n sósavoldat és 650 ml víz elegyében 24 óra hosszat hidrogénezzük légköri myoimás alatt, palládium-katalizátor jelenlétében. A továbbiakban az 1. példa e) pontja alatt leírthoz hasonló módon járunk el. 3. példa: 30,9 g N-karbobenzoxi-L-arginint, 16,5 g L-prolin-metilészter-hidrokloridot és 24,8 g diciklohexil-karbodiimidet feloldunk —10° hőmérsékleten 250 ml diimetilformamid és 100 ml acetonitrii elegyében, az oldatot éjjelen át 20° hőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuum alatt bepároljuk, a maradékot petroléterrel eldörzsöljük, 300 ml metanol és 300 ml n-nátriumhidroxidoldat elegyében oldjuk, az oldatot 1 óra hosszat állni hagyjuk, majd 500 ml vizet adunk hozzá, leszűrjük, híg sósavval semlegesítjük, szűrünk, a kapott terméket vízzel mossuk és megszárítjuk. Ily módom 28 g N-karbobenzoxi-L-arginin-L-prolint kapunk, amelyet azután feloldunk 250 ml dimetilformamid és 100 ml acetonitrii elegyében. Az oldathoz —10° hőmérsékleten hozzáadunk 18 g diciklohexil-karbodiimidet, 16,5 g L^prolil-glicin-terc.-butilésztert és 12 g toluolszulfonsavat, az elegyet 16 óra hosszat hagyjuk szobahőmérsékleten állni, majd etiléter hozzáadása útján lecsapjuk, a kapott terméket 200 ml jégecetben oldjuk, 2 óra hosszat száraz sósavgázt vezetünk az oldaton keresztül, majd bepároljuk, a maradékhoz 100 ml n-nátriunihidroxidoldatot és 100 ml metanolt adunk, sósavval semlegesítjük, leszűrjük,