150141. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy eddig ismeretlen polipeptid előállítására

2 150.141 képletnek megfelelő szabad savvá szappanos!tjük el. Nitro-L-aiiginil-p-nitro-benzilésztert N-karbobenzoxi-L-fenil-alaininnal kondenzáltatunk, a karbobenzoxi-csoportot brömhidrogénsavval jégecetes közegben szelektíven lehasítjuk, az így kapott dipeptidet N-karbobenzoxi-L-piroliinnal kondenzáltatjuk, a karbobenzoxi-csoportot szintén lehasítjuk és a kapott tripeptidet N-karbobenzoxi-L-fenilv-alanin-L-szeril-aziddal kondenzáltatjuk. Ez utóbbi vegyületet oly módon állíthatjuk elő, hogy N^karbobenzoxi-L-fenil-alanint L-szerin-metilészterrel kondenzáltatunk és a kapott dipeptidésztert a hidrazidon keresztül aziddá alakítjuk át. A fenti módon kapott pentapeptid karbobemzoxicsoportjának brómhidrogénsav segítségével trifluorecetsavas közegben történő lehasítása útján jutunk a (III) képletű pentapeptidhez, amelyet azután a (II) tetrapeptiddel a (IV) képletű védett íionapeptiddé kondenzáltatjuk. A védőcsoportok hidrogenolitos lehasítása útján jutunk a biológiailag aktív (I) nonapeptidhez. Eljárhatunk oly módon is, hogy a pentapeptid R" és R'" védőcsoportjait a tetrapeptiddel való kondenzál tatás előtt hasítjuk le. Felhasználhatunk a kondenzációhoz oly tetrapeptidet is, amelynek képletében R' hidrogénatomnak felel meg. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik; megjegyzendő azonban, hogy a találmány köre egyáltalán nincsen ezekre a példákra korlátozva. A példákban az összes hőmérsékleti adatok Celsius-fokokban értendők. I. példa: a) N-karbobenzoxi-initro-L^arginil-L-prolin. 35,5 g N-karbobenzoxi^nitro-L-arginmt, 12,9 g L-prolin-metilésztert és 24,8 g diciklohexil-karbodiimidet —10° hőmérsékleten feloldunk 250 ml dimetilf ormamid és 100 ml acetonitril elegyében, az oldatot éjjelen át 20° hőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuum alatt bepároljuk, a maradékot petroléterrel eldörzsöljük, etilacetátban oldjuk, leszűrjük és a szüredéket híg sósavval, majd híg ammóniumhidroxiddal mossuk. Azután az etilacetátot vákuum alatt elpárologtatjuk, a maradékot 300 ml metanol és 300 ml n-nátriumhidroxidoldat elegyében oldjuk, 1 óra hosszat állni hagyjuk, majd 500 ml vizet adunk hozzá, leszűrjük, a szüredéket híg sósavval megsavanyítjuk és etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos kivonatból az oldószert elpárologtatjuk és a maradékot metanol hozzáadásával kristályosítjuk. Ily módon 23,0 g N-karbabenzoxi^nitro-L-arginil-L-prolint kapunk; op. 119°; [«ID'= — 47° <c = 2, jégecetben). b) N-karbobenzoxi-nitro-Lnarginil-L-pi olil-L-prolil-glícin. 24,9 g N-karbobenzoxi-L-prolin és 14,0 ml trietilamin 300 ml kloroformmal készített oldatához —10° hőmérsékleten 9,6 ml klórhangyasav-etilésztert adunk, majd 10 perc múlva 11,3 g glicin-terc.-butilészteirt adunk az elegyhez. Az elegyet 2 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd híg ammöniumhidroxidot és híg foszforsavat mosófolyadókként alkalmazva .mossuk a szerves oldatot, azután az oldószert vákuum alatt elpárologtatjuk, a maradékot metanolban oldjuk és a karbobenzoxi-csoportot katalitikus hidrogénezés útján lehasítjuk. Az oldatot ezután bepároljuk, a maradékot 250 ml dimetilformamid és 1O0 ml acetonitril elegyében oldjuk, majd 40,0 g N-karbO(benzoxi^nitro-L-arginil-L-prolint és 22,0 g diciklohexil-karbodiimidet adunk az oldathoz. Az elegyet éjjelen át 20° hőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuum alatt bepároljuk, a maradékot petroléterrel eldörzsöljük, kloroformban oldjuk, az oldatot híg foszforsavval, majd híg ammóniumhidroxid-oldattal mossuk, nátriumszulfáton szárítjuk, azután pedig 4 óra hosszat 35° hőmérsékleten száraz sósavgázt vezetünk az oldaton keresztül. Utána az oldatot vákuum alatt bepároljuk és a maradékhoz etilétert adunk; ily módon 30,2 g N-karbobenzoxi-nitro-L-arginil-L-prolil-L-prolil-glicint kapunk, amely 115°-on bomlás közben olvad. Egyenértéksúly 605, talált érték: 602. c) N-karbobenzoxi-L-fenilalanin-L-szeril-azid. 30,0 g N-karbobenzoxi-L-fenilalanint, 15 g L-szerin-metilészter-hidrokloridot, 14 ml trietilamint és 24,8 g diciklohexil-karbodiimidet 1500 ml acetonitrilben oldunk .—10D

hőmérsékleten, majd az oldatot éjjelen át 20°-on állni hagyjuk, leszűrjük, vákuum alatt bepároljuk, a maradékot petroléterrel eldörzsöljük, etilacetátban oldjuk, híg sósavval, majd híg ammóniumhidroxid-oldattal mossuk az oldatot, nátriumszulfáton szárítjuk, majd petroléter hozzáadása útján kicsapjuk. A kapott anyagot 300 ml metanolban oldjuk, az oldathoz 12 ml hidrazinhidrátot adunk, éjjelen át 20° hőmérsékleten állni hagyjuk, leszűrjük és a kapott terméket metanollal, majd éterrel mossuk. Ily módon 28,2 g hidrazidot (op. 193°) kapunk, amelyet 100 ml jégecet és 100 ml 2 n sósavoldat elegyében oldunk. Az oldatot —5° hőmérsékletre hűtjük le, majd 15 ml 5 n nátriummitritet adunk hozzá, 10 perc múlva pedig 450 ml jéghideg vizet adunk az elegyhez. A képződött csapadékot leszűrjük, vízzel mossuk és vákuum alatt gyorsan megszárítjuk. Ily módon 26,1 g azidot kapunk, amelyet azonnal tovább dolgozunk fel. d) L-fenilalanil-L-szeril-L-prolil-L-fenilalanil-nitro-L-arginin-p-nitro-behzilészter. 106 g N-karbobenzoxi-nitro-L-arginint, 63 ml trietilamint és 77 g p-nitro-ibenzilkloridot 450 ml dimetilformamidban oldunk, az oldatot éjjelen át 80° hőmérsékleten tartjuk, vákuum alatt elpárologtatjuk, a maradékot etilacetátban oldjuk, az oldatot híg sósavval, majd híg ammóniumhidroxidoldattal mossuk, nátriumszulfáton szárítjuk és vákuum alatt bepároljuk. A kristályosított maradékot brómhidrogénsav 2,2 n jégecetes oldatának 1100 ml-jében oldjuk és pontosan 20 percig hagyjuk 20° hőmérsékleten állni. Ezután az oldatot vákuum alatt bepároljuk, a maradékhoz etilétert adunk és a kristályosodott maradékot 300 ml dimetilf ormamid és 35 ml trietilamin elegyében oldjuk, majd ezt az oldatot beleöntjük