150127. lajstromszámú szabadalom • Eljárás C-cephalosporin-származékok előállítására
4 150.127 sósavoldaftal 20 C° hőmérsékletein, kb. 3 napig tartó kezelés esetén a Cc -cephalosporin-imagot kapjuk jó termelési hányaddal. Ezeket a reakciófeltételeket a 0,1 n sósav oldattal 20' C° hőmérsékleten kb. 5 napig tartó kezeléssel hasonlítbatjuk össze, amely a legelőnyösebb C^'cephalosporinhozamot adja, a 0,1 n sósavoldattal történő kezelések közül; ez alatt az idő alatt lényegileg eltűnik a reakcióéi egyből a reakció korábbi szakaszaiban képződött összes C-cepihalosporin-mag is. A C-cephalosporin-mag nem. tartozik azok közé a savas vegyületek közé, amelyeket a Ciba Symposium idézett cikkének szerzői felismertek, de közelebbről nem jellemeztek; ez a tény az alábbi okok alapján látható be: Elsősorban, a C-cephalosiporin 1 n sósavoldattal 20 C° hőmérsékleten 5 napot meghaladó ideig történő kezelése után feltételezhető, hogy C-cephalosporin-mag ok lényegileg már egyáltalán nem maradtak a reakcióelegyben. A C-cephalosporinmagok előállításának legkedvezőbb reakciófeltételei: 0,1 n sósavoldattal 3 napig történő kezelés; szűk határok közé esik az az időtartam, amelyen belül számottevő termelési hányadokkal kapjuk a mag-vegyületet. így, 5 napot meghaladó időtartam után lényegileg már semmi C-cephalosporin-mag nem marad az oldatban. Másrészt, az azóta nyert tapasztalatok azt. mutatták, hogy a C-cephalosporin-mag abban a.Z. esetben sem marad elegendő mennyiségiben a reakcióelegyben ahhoz, hogy pozitív ninhídrin-reakciót kapjunk, ha a kezelés csupán az optimálisnak tekinthető 3 napig tartott. Az optimális feltételek esetén a mag-vegyületet későbbi időpontokban a fenilacetilezési módszerrel és az ezt követően végzett aktivitás-próbával mutattuk ki, amint ezt a fentebbiekben leírtuk. Mindenesetre még olyan esetekben is, amikor a C-eephalosporin-magot tartalmazó oldatot olyan, koncentrált alakra hozzuk, hogy kiimutatható mértékű njnhidrin-reakciő következik be, ez a reakció nem mutatja a jellegzetes kék vagy bíbor színt. így a C-cephaloeporinrnag nem tekinthető a szó általánosan elfogadott értelmében ninhidrin-pozitívnak. A C-cephalosporin-mag, amelyet 7~aminocephalosporin-savnak nevezünk el, hasonló térbeli szerkezetet mutat, mint a Cephalosiporiuim fermentációja útján kapott C-eeiphalosporin molekulájának megfelelő része. A vegyület további azonosítása fenilacetilezés után az alábbi tulajdonságok alapján történhet meg: 1. A C-cephaloisporiín-imagot tartalmazó frakció a készítmény elektroforézises vizsgálata során pH = 7 esetén (oldószerként vizes kollidinaeetátot alkalmazva) a C-cephalosporinnál valamivel gyorsabban vándorol az anód felé. 2. A C-oephalosporin-magot, tartalmazó frakció pH = 4,5 esetén (oldószerként vizes pirklinacetátot alkalmazva) kb. fele olyan sebességgel vándorol az anód felé, mint a C-icephalosporin. 3. A C-cephalosiporin-'magot tartalmazó frakció az elektroforézis pH = 4,0 mellett történő lefolytatása esetén (oldószerként vizes piridinacetátot alkalmazva) megmarad a kiindulópont közelében és csupán viszonylag csekély mértékű vándorlást mutat az anód felé. Ilyen feltételek mellett pedig a C-cephalosiporin még mindig csaknem ugyanolyan sebességgel vándorol az anódhoz, amint pH = 7 esetéin. 4. 10%-os ecetsavban lefolytatott elektroforézis, a papírról történő eluálás és n-sósavoldattal 105 C° hőmérsékleten 16 óra hosszat, folytatott hidrolízis után ez a vegyület négi glicint ad (50 meg C-cephelofíporin-n).iag ily módon hasonlóintenzitású foltot ad, mint amilyen az 50 meg C-eephalosporin hidrolízise esetén kapott glicin-folt), alfa-amino-adipir.sav azonban egyáltalán nem keletkezik. Ez azt mutatja, hogy a vegyületben nem volt jelen a C-eephalosporin molekulájában jelenlevő' oldallánc. 5. A C-cephalosporin-imagot tartalmazó frakció hasonló R/-értéfcet mutat, mint az, n-fenilacetii-C-cephalosporm (0,08—O.IS), 4:1:5 térfogatarányú buta:! ol-etanol-víz elegyben. 6. A C-cephalcEporiin-mag butanol-etanol-víz elegyben történő krornatogratfálás után, vagy pedig elektroforézis után, ha a papírom 0,1%-os zselatinoldatban levő penicillináz-einzimmel permetezzük be (az enzim-koncentráció tízszer akkora, mint amekkora 50 meg benzilpemiciíliin foltjának inaktiválására szükséges), olyan foltot ad, amelynek -aktivitása nyilvánvalóan nem kisebb, mint ha fenilacetilkloriddal és piridnnel permetezzük a foltot. 7. Ha papíron C-cephalosporin-mag foltot képezi? nk és ezt pH — 7 mellett piridinacetáttal (2 mól piridin) permetezzük be, majd nedves állapotban 2 mólos piridinaceíát-oldiat gőzei fölé helyezzük 16 órára 37 C° hőmérsékleten, majd megszárítjuk, pH = 7 meíkett elektroíorézisinek vetjük alá és azután fenilacetilezzük, aktív folt jelenik meg {a C/i-cephalcsporiin-tpiridínj-ma g f emlacetil-származékának hatására) a semleges helyzetben, egy folt jelenik meg továbbá valamivel közelebb az anódhoz, mint a C-cephalosporki foltja. 8. Papír-efektroíorézis után a mag-vegyület ninhidrinnel sárgás-barna színt ad., amely később szürkéskék színűre változik (a 6-aminopenieillánsavról közölteik, hogy ez a vegyül et nem ad rendes színreakciőt ninhidrinnel). Papír-eleiktroforézis vagy kromatográfia útján ez; a vegyület könnyen kimutatható (a C-ceiphalosporinhoz hasonlóan), sötéten abszorbeáló foltként, ha a papírt valamilyen ibolyántúli sugárforrás elé helyezzük. A C c ~cephalosporin-imag., amely a dezacetil-7--aim in ,c - eephalosporánsai v lak tonj ának t e k inthet ő, szintén hasonló térbeli szerkezetet mutat, mint a Cephalosporiumfool fermentáció útján kapott C-cephalosporin molekulájának megfelelő része. További, azonosítása fenilacetilezés után az alábbi tulajdoraságofc alapj án történihet: 1. A Cc-cepihalosporinnmag piridinacetát tompítóoldatíban (pH = 4,5) végzett elektroforézis során kb. ugyanolyan távolságra vándorol a katód, irányában, mint ahogyan a C-cephalosporin-mag az anód irányában vándorol. 2. 10% ecetsava« toimipítóval végzett papírelektroforézis során a Cc-ceiphalospcrin-mag két és félszer olyan gyorsan vándorol, a katód irányában, mint a C-cephalosporin-mag. 3. Butanol-etanol-vízi 4:1:5 téríossterányú elegy éhen kromatografálva a C c -cephal ospori nmag R/-faktora 0,33, míg a C-cephaloporiné 0,08—0,15, a CA-ciephalosporkHrnagé 0,08.
