149186. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tetraciklin előállítására

2 149.186 L. Sz. 536 (Klórtetracifclint termelő \ Streptomyces aureofaciens törzs). \ x UV besugárzás C—241 x Röntgen besugárzás D—6 UV besugárzás \ benzilrhodanid jelenlétében G—993 Röntgen besugárzás utólagos fagyasztással kombinálva CD—815 \ Streptomycin kezelés CDS—425 Mint a diagramból kitűnik, az új mutans többfajta, többszörös és kombinált mutagen behatás eredményeképpen keletkezett. A diagramban szereplő G—993 mutans lényeges sajátságaként kiemeljük a cisztein-metionin deficienciát. Ebből nyertük a CD—815 jelzésű mutánst, amely cisztein-metionin deficienciát már nem mutatott. Innen streptomycin szelektív mutagen behatására, jutottunk a CSD—425 mutánshoz, majd ebből redukált Koenzim A (redukált acetiláló koenzim, Lipmann, F. és mtsai. J. Biol. Chem. 187. 869. 1947.) előkezeléssel kombinált és cianiddal szenzibilizált újabb röntgensugár behatással a CDSD—314 mutánshoz, A Koenzim A alkalmazását igen kedvezőnek találtuk az össziantibiotikum termelőképesség megőrzése szempontjából. A tetraciklin szintézis irányításánál szemelőtt tartottuk azt a körülményt, hogy a klórtetraciklin bioszintézise folyamán a klóratom beépülése nem a kész tetraciklin molekulán, hanem sokkal korábbi fázisban, a tényleges antibiotikum termelés megindulása előtt, történik. Kloridhiányos táptalajon a mikroorganizmus normális fejlődése mellett a klórozó enzimrendszer csökkent aktivitását lehetett megfigyelni. A kritikus időponton túlhaladt kultúrában utólagos kloridadagolás a klórozó aktivitást már alig befolyásolta. A kritikus klórozási szakaszban alkalmazott röntgen sugárzás mutagen hatásara, melynél az érzékenységet cianiddal fokoztuk, kaptuk meg végül is a várt tulajdonságokkal rendelkező mutans törzset. Korábbi, vagy későbbi fejlődési szakaszban alkalmazott mutagen behatással hasonló Táptalaj összetétel 1. Szaacharóz növekedés aszpargi spóraképzés agar pigmentképzés légmicélium • inkufoálás SH—CoA-val kiegészített szintetikus táptalajon \ Röntgen besugárzás \ KCN jelenlétében \„ CDSD—314 (Tetraciklint 90% felett termelő törzs). eredményt elérni nem tudtunk. A hatásmechanizmus még nem tisztázott, de feltehető, hogy az észlelt hatás ribonukleinsav anyagcserére gyakorolt specifikus befolyással kapcsolatos, A CDSD—314 törzs a maximális antibiotikum termelést igen rövid idő alatt (48—52 óra) biztosítja (az eredeti L. Sz. 536 törzs fermentálási ideje 72—75 óra), amely tulajdonság nagymérteikben fokozza a vele való termelés gazdaságosságát. Az eljárásunk segítségével előállított CDSD—314 mutáns sok morfológiai és fiziológiai jellegiben eltér a kiindulási törzstől. Pridham és mtsai (Appl. Microbiol. 6. 52. 1958. legújabban ismertetett rendszerében az új mutáns az eddig leírt Streptomyces aureofaciens törzsektől eltérő sorozatba tartozik. A kiindulási törzs (L, Sz. 536) spóráinak és sporofóráinak színe szürke, a sporofórok nyitott egyszerű spirálisban fejlődnek. Az új mutáns (CDSD—314) esetében a sporofórok horog alakban meghajlottak, a spórák és sporofórok színe fehér. Mindezek és egyéb járulékos bélyegek alapján az új mutáns a „Retinaculum-Apertum" csoport első sorozatába („White series") sorolható, míg a kiindulási L. Sz. 536 törzs és az egyéb irodalomból ismert antibiotikumtermelő Sreptomyces aureofaciens törzs (A—377; NRRLB— —1286; NRRLB—1287; NRRLB—1288;' HA—20) a csoport hatodik sorozatába („'gray series") tartozik. Az alábbi összeállításban közöljük a kiindulási L. Sz. 536 törzs és az új CDSD—314 mutáns néhány jellemvonását összehasonlítás céljából: L. Sz. 536 CDSD —314 jó jó jő jó málnavörös nines szürke fehér