144909. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikumok előállítására fermentálással

4 144.909 tottuk fenn. A 35-ik órában és a továbbiakban időszakosan végzett próbákkal élő élesztőgombák jelenléte többé nem volt kimutatható. A fermentálás 70-ik órájában 900 gamma/ml oxitetraciklin-termelést értünk el. 5. példa Táptalaj összetétele: szacharóz *? % szójaliszt 1,25% NaCl 0,15% CaC03 0,6 % ammóniumszulfát 0,25%, kukoricalekvár B 54 0,'7 % desztillált vízzel 100% -ra kiegészítve. kezdeti pH 6,95 A tápoldat 50 literét kavaróval, hűtő- és fűtőkígyóval és szellőztető koszorúval felszerelt fakádban 10 percig forraltuk. Lehűtés után hozzádtunk 150 ml aktidiont, majd beoltottuk az S. aureofaciens Bg 16 törzs 2 liter 48 órás vegetatív inokulumával (koncentráció: 420 gamma/ml klórtetraciklin). A tápoldatot szándékosan fertőztük a következő tenyészetekkel: Sacharomicas oerevisiae, szuszpenzióban 10 ml Oidium lactis törzs 24 órás tenyészete, malátakivonatban 10 ml Escerichia coli törzs 24 órás szuszpenziója folyékony húslevesben 20 ml A fermentálást 28 C°-on kavarás közben (percenként 300 fordulatszám) és szellőztetéssel (percenként 25 1 levegő) folytattuk le és közben sterilitási próbákat végeztünk. Megállapítottuk, hogy az 50 tenyésztési órától kezdve a táptalajból minden élő fertőző mikroflóra eltűnt. A 68-ik órában értük el a maximális termelést: 980 gamma/ml klórtetraciklint. 6. példa A következő összetételű tápoldat 100 literét: szaharóz 3 % szójaliszt 2 % CaC03 0,5% NaCl 0,3"/o ammóniumszulfát 0,3%, kukoricalékvár B 0,6% desztillált vízzel 100%-ra kiegészítve. A pH-t sterilizálás előtt 20%-os kénsavval 6,0-ra állítottuk be, majd az oldatot kavaróval, hűtőkígyóval ós szellőztető koszorúval felszerelt fakádban 10 percig pasztörizáltuk. A tápoldatot beoltottuk 2%, a Streptomices aureofaciens BG —16— 3 törzs 40 órás vegetatív inokulumával, melynek töménysége 620 gamma/ml klórtetraciklin volt, ezenfelül hozzáadtunk 500 mg undecilénsavat és 200 klórkinolint. A tenyésztés megindulásakor a tápoldatot megfertőztük malátakivonatban szuszpendált Hansenula anomala törzs 50 ml-ével. A fermentálást 28 C°-on, kavarás közben (percenként 270 fordulatszám) és szellőztetéssel (percenként 0,3—0,5 térfogat levegő) folytattuk le. A 80-ik órában elértük a 820 gamma/ml klórtetnaciklin-töménységet. A fertőzést a fermentálás közben mikroszkóppal megfigyeltük és a 36-ik óráig az élesztőgombák erős eronesolódását állapítottuk meg. Az élesztőgombák szaporodása a fermentálás közben nem volt kimutatható. 7. példa A következő összetételű tápoldat 100 literét: szacharóz 3 % szójaliszt , 1,8 % NaCl 0,2 % ammóniumszulfát 0,25% CaC03 0,5 % kukoricalekvár B 54 0,6 % a többi desztillált víz. 200 literes kőagyagkádban forraltuk. 10 perces forralás után a közeg pH értéke 6,8 volt. Ezután a tápoldatot áthelyeztük kavaróval, szellőztetőkoszorúval ós hűtőkígyóval felszerelt 150 literes fakádba és beoltottuk a Streptomices aureofaciens Bg törzs 46 órás inokulumának (koncentráció: 520 gamma/ml klórtetraciklin) 5 literével. A tenyésztést kavarás közben (percenként 260 fordulatszám), szellőztetéssel (percenként 20—50 liter levegő), 28 C°-on folytattuk le. Ötven órai tenyésztés után elértük a 760 gamma/ml koncentrációt. Ekkor a tápoldatot —5 liter kierjedt tápoldat kivételével, melyet a kádban hagytunk — leeresztettük és a leeresztett oldatot vegyi úton kristályos klórtetraciklin-hidrokloridra dolgoztuk fel. A kádban maradt 5 liter kierjedt oldathoz hozzáadtunk 100 liter friss, azonos összetételű tápoldatot, melyet előzetesen 10 percig külön kiforraltunk és a fermentálást a fent ismertetett módon megismételtük. Kilenc egymásután következő generációval azonos módon megismételtük az eljárást és 50 órás tenyésztés után a következő termelési értékekhez jutottunk: 780, 814, 825, 962, 840, 720, 830, 750 és 640 gamma/ml klórtetraciklin. 8. példa 500 literes kőagyagkádban melyet a feldolgozás folyamán nyitvatartottunk és amely hűtőkígyóval, Waldhof-rendszerű kavaróval és közvetlen gőzbevezetéssel volt ellátva, 10 percig forraltuk a következő összetételű tápoldat 350 literét: Sacharóz 3 % szójaliszit 2 % CaCOs 0,6% amimóniumszulfát 0,3 0/0 NaCl 0,250/0 kukoricalekvár B 54 0,6 0/0 a többi desztillált víz. 28 C°-ra való lehűtés után és 6, 98 pH értéknél a tápoldatot beoltottuk 5%, 40 órás 520 gamma/ml klórtetraciklin koncentrációjú vegetatív inokulumimal. A tápoldatot percenként 510 fordulatszámmal kavartuk és csupán olyan levegővel szellőztettük át, melyet a kavaró az oldat felületéről szívott le. A maximális termelést: 920 gamma/ml klórtetraciklint, a 62. órában értük el.