144909. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikumok előállítására fermentálással

144.909 3 gyengébb. Az energiaköltségek, a steril eljárásokkal összehasonlítva, ugyancsak jelentékenyen csökkennek, mert a találmány szerinti, nemsteril feltételek mellett nem szükséges magosnyomású gőzzel dolgozni. Az eljárás különböző foganatosítási módjait az alanti példák kapcsán az antibiotikumok fermentálás útján való előállítására ismertetjük. A példák valóban csupán a találmány példaképpeni illusztrálására szolgálnak és semmiképpen sem korlátozzák annak széleskörű alkalmazási és változtatási lehetőségeit. 1. példa. A következő összetételű tápoldatot állítjuk össze: Szaharóz 3% Szójaliiszt 2% NaCl 0,5% CaC03 0,4% ammoniumszulfát 0,2% Melasz 0,2% kukoricalekvár 0,5% a többi desztillált víz. A pH-t a sterilizálás előtt 20%-os kénsavval 5,9-től 6,0-ig terjedő értékre, a sterilizálás után 7,0-ra állítjuk be. Az S. aureofaciens- Bg törzs első vegetatív generációját a fentemlített összetételű steril tápoldatban készítjük elő. Ezt a tápoldatot 28 C°-ra temperálva, a ferde agárlemezekről vett spóra-inokulummal sterilen beoltjuk. 48 órás steril tenyésztés után rázógépen, 28 C°-on, a lombikban helyet foglaló tápoldat aktivitása 300 gamma/ml klórtetraciklinnek felel meg. A következő vegetatív generáció részére ugyanilyen összetételű tápoldatot készítettünk, ezt azonban nem sterilizáltuk, hanem csupán 10 percig forraltuk, 50°-ra lehűtöttük és 80 ml-es adagokban egy-egy 500 ml-es nem steril főzőlombikba osztottuk el. Minden lombikot 3 ml, a fentiek szerint előkészített vegetatív inokulummal oltottunk be, az oltást az inokulum pipettázásával, minden sterilizáló rendszabály mellőzésével végeztük. A beoltott lombikokat nyitva állni hagytuk és a rázógépen fermentáltuk. 72 órás fermentálás után 1370 gamma/ml átlagos termelést értünk el. Az egyedi lombikok termelése 1260 és 1410 gamma/ml között mozgott. Az ellenőrző lombikokban, melyekben a fermentálást azonos--módon készítettük elő és hagytuk lezajlani, de a sterilizálásra vonatkozó valamennyi rendszabály figyelembevételével 1270 gamma/ml átlagos termelés volt kimutatható. Az egyedi lombikok termelése 1190—1382 gamma/ml között ingadozott. A nemsterilen fermentált lombikok tartalma a sterilitási próbáknál teljesen fertőzésmentesnek bizonyult, minthogy idegen mikroorganizmusok jelenléte nem volt kimutatható. . 2. példa. Az 1. példa szerinti összetételű tápoldatot 10 perc;

g nyitott, zománcozott edényben forraltuk és 30 G°-ra lehűtve, 20 literes térfogatú nemsteril fermentáló tartályba öntöttük. Ezután a tápoldatot beoltottuk az S. aureofaciens Bg—-16 törzs 1 liter 60 órás vegetatív inokulumával. Ezt az inokulumot 20 liter térfogatú oltótartályban állítottuk elő és az 510 gamma/ml klórtetraciklint tartalmazott. A fermentálást 28 C°on, nyitott tartályban a szokásos percenként 300 kavarófordulatszám mellett és az erjesztett oldat térfogatára számított 0,5 térfogatrész levegővel szellőztetve folytattuk le. 60 órás fermentálás után a klórtetraciklin-termelés elérte a 960 gamma/ml-t. Az ellenőrző-fermentálást ugyanazon vegetatív inokulum alkalmazásával és a szokásos steril körülmények mellett végeztük és a termelés 910 gamma/ml klórtetraciklin volt. 3. példa 200 liter tápoldatot fakádban, amely kavaróval, szellőztető koszorúval és hűtőkígyóval volt felszerelve, közvetlenül bevezetett gőzzel 10 percig forraltunk. A tápoldat összetétele: szaharóz 2,5 % kukoricalekvár B 54 1,3 % ammoniumszulfát 0,33% CaC03

0,5 % desztillált vízzel 100%-ra kiegészítve. A tápoldatot lehűtés után beoltottuk az S. aureofaciens 3 térf.-% 30 órás vegetatív inokulumával, mely 25 gamma/ml klórtetraciklint tartalmazott. A tápoldathoz hozzáadtunk 4 g tiszta klórtetraciklin-klórhidrátot, miáltal 20 gamma/ml töménységet értünk el. A fermentálás nyílt kádban percenként 285 fordulatszámú kavarással és szellőztető koszorún át bevitt percenként 100 liter félsteril levegővel folytattuk le. A tenyésztési hőmérsékletet, 28 C°-ot, hűtőkígyóval tartottuk fenn. 50 órás fermentálás után a termelés 820 gamma/ml. 4. példa A következő összetételű tápoldat 500 literét: glukóza 1,5 % keményítő 1,5 % ammoniumszulfát 0,35% CaC03

0,5 % NaCl 0,4 % kukoricalekvár 0,5 % a többi desztillált víz. Kőagyag-kádban 10 percig forraltuk. A kád kavaróval, szellőztetőkoszorúval és hűtő-fűtő-kígyóval volt felszerelve. A tápoldatot beoltottuk a Streptotmices rimosus 40 órás vegetatív inokulumának 50 literével, (koncentráció = 300 gamma/ml oxitetraciklin) melynek ezenfelül még fungicid hatása is volt. A beoltás után a tápoldatot szándékosan fertőztük a Sacharomices fragilis törzs 24 órás, szűrt tápoldatban készített szuszpenziójának 10 ml/-ével. A fermentálást 28°-om percenként 260 fordulatszámú kavarás mellett és percenként 250 1 félsteril levegővel való szellőztetéssel foganatosítottuk. Tenyésztés közben ellenőriztük a fermentálóközeg csíramentességét, A 30-ik óráig élő élesztőgombák jelenléte mikroszkópos sterilitási próbákkal kimutatható volt, ezek azonban nem szaporodtak. A pH-t a fermentálás folyamán az említett időpontig n-NaOH hozzáadásával tar-