127956. lajstromszámú szabadalom • Eljárás korionos anyag elszigetelésére
127956. 5 tékeny mennyiségű nálriumszulfát ki nem kristályosodott. Ezt a sófrakciót vagy szűréssel vagy oentrifugálással elkülönítjük, kevés jéghideg vízzel mossuk és azután 5 félretesszük. Most az anyalúgot a fentemlífcett két másik kivonattal egyesítjük és az legyesített oldatokat alacsony hőmérsékleten cellofánhártyán át dializáliuk. Nem kívánatos a só egész mennyiségének eltá-10 volítása, mivel a rákövetkező lépéshez kis mennyiségű; körülbelül 4 g sóra van szükség. A dializáit oldatot térfogatának' 6-szorosát kitevő alkohollal és kevés nátriumacetáttal kicsapjuk. A csapadékot ma-15 gában véve szokásos módon feldolgozzuk; súlya körülbelül 10 g. Ezt a frakciót 50 cm3 vízben feloldjuk és a pH-értéket ecetsavval 3,7-re beállítjuk. Ezután 1-2 órahosszat 50 cm3 klo^ 20 roformmal és kevés amilakobollal rázzuk. ICentrifugálás után a vizes oldatot félre-* tesszük és körülbelül. 20 C° hőmérsékleten tartjuk, míg a kloroformos réteget, a gélt beleértve, 1 / 2 órahosszat 50 cm 3 1%-os 25 nátriumszulfáfoldattal rázzuk. Ezzel a műi jvelettel körülbelül 2 g hatástalan proteint távolítunk el. A vizes oldatokat egyesítjük, semlegesítjük és térfogatuknak 6-szorosát kitevő alkohollal, kevés nátriumace-30 tát hozzáadása mellett, kezeljük. A kapott csapadékot, melynek mennyisége körülbelül 8 g, 60 cm3 vízben újra feloldjuk és lehetőleg tökéletesen dializáljuk (a dialízist kicsapás és újbóli feloldás nél-35 kül is elvégezhetjük). A dialízis befejezte! fután az oldatot a belső csőből kivesszük iés pH-értékét 7,5—8,0-ra állítjuk be. Ezután 60% töménység eléréséig alkoholt keverünk hozzá. Az egészhez most körül-40 belül 2,5o/o nátriumaoetátot adunk, mire csapadékképződés mutatkozik. A csapadékot kioentrifugáljuk és legalább egyszer 6O0/0 alkohollal, mely kis mennyiségű nátrmmacetátot tartalmaz, újra kivonatoljuk. 45 A maradékot félretehetjük, mivel nem tartalmaz számbavehető mennyiségű hormont. Az egyesített, víztiszta oldatokat 1,5 rész alkohollal kicsapjuk és 20 C°-on vagy ennél alacsonyabb hőmérsáklie-50 ten néhány órán át ülepítjük. A csapadékot magában véve ismert módon feldolgozva, 1,38 g mennyiségű terméket kapunk, melynek hatásossága grammonként 56500 p. e., összesen tehát 78000 p. e. 55 A kiindulási anyagul használt plazma hatásossága 3,7 p. e:/cm3 , összesen tehát 79500 p. e. volt. így tehát az eljárás a kiindulási anyag hatásosságából 980/0 megtartását teszi lehetővé. A találmány szerinti eljáráshoz külön- 60 böző olyan nyersanyagokat alkalmazhatunk, melyek a korionos anyagot tartalmazzák. A mindenkor választott nyersi'anyag szerint a kiindulási anyagot a vizes oldattal való kivonalolás előtt megfelelő 65 előzetes kezelésnek vethetjük alá. Ilyen előzetes kezelési intézkedések a kiindulási anyag őrlése, sóíelestegek eltávolítása, fagyasztás a szemcsézés és a sejtszövet feltárására, enyhe elpárol ogtatás és töményí- 70 tés, előzetes kivonatolások és kicsapások, sttb. A vizes oldattal végzett kivonatoláshoz előnyösen szervetlen lúg, pl. nátrium- vagy káliumhidroxid, nátrium- vagy káliumkar- 75 bonát, ammoniumhidroxid, litiümhidroxid vagy báriumhidroxid oldatát alkalmazhatjuk. Mindamellett használhatók piridin, trimetilamid, karbamid és egyéb nitrogénbázisok oldatai, valamint savak, pl. ecet- 80 sav, híg foszforsav és tejsav is. A vízzel nem elegyedő folyadékkal való összerázást, (melynek célja gél képzése, legalább olyan erőteljesen kell végezni, hogy a vizes kivonattal azonnal emulzió képződjék. Lé- 85 myeges, hogy a vizes kivonat pH-értékét a vízzel nem elegyedő folyadékkal való; összerázás előtt legalább 5-re, előnyösen azonban 4-nél alacsonyabbra állítsuk be. Ha a pH-érték 3-nál sokkal alacsonyabb, 90 akkor az egyéb kísérleti feltételekel, pl. a hőmérsékletet, előnyösen enyhén választjuk meg. A pH-éríék beállítása bármilyen más ismert módszerrel, pl. szerves sav, mint ecetsav, vagy valamely alkalmas sa- 95 vanyú só hozzáadásával végezhető. Minden olyan rákövetkező művelethez, melynél vízzel nem keveredő folyadékokat alkalmazunk, a pH-t kívánatos ugyanilyen' értéken tartani. 100 Lényeges, hogy a vizes kivonat térfogata oe legyen sokkal nagyobb, mint a gélképzéshez használt vízzel nem keveredő folyadéké. Ennek következtében fontos, fiogy a vizes oldat térfogatát a vízzel nem 105 keveredő folyadékkal való második és Jminden többi kezelés előtt csökkentsük. A térfogatcsökkenés bármilyen alkalmas módon végezhető, így pl. bepárolással vagy a korionos anyag kicsapásával és annak 110 korlátolt mennyiségű vízben történő újbóli feloldásával. A vizes réteg térfogatcsökkentésével egyidejűleg arról is kell gondoskodni, hogy a. jelenlevő só tömény-
