127956. lajstromszámú szabadalom • Eljárás korionos anyag elszigetelésére
6 127956, ségét annyira csökkentsük, hogy a megmaradó sómennyiség a rétegek elkülönülését a vízzel nem keveredő folyadékokkal történő későbbi kezelés során ne zavarja. 5 Ha a gél képzéséhez kellő mennyiségűi vízzel nem keveredő - folyadékot használunk, akkor három réteg képződik, nevezetesen a korionos anyagot tartalmazó vizes réteg, továbbá a vízzel nem keveredő 10 réteg és végül gél-csapadék rétege, mely valószínűleg a vízzel nem keveredő folyadéknak a valódik proteinekkel alkotott laza molekulás aggregátuma. A gél-csapadék a használatos módszerek valamelyi-15 kével. választható külön, így pl. centrifugálással, dekantálással, szűréssel, stb. Megjegyzendő, hogy a vízzel nem keveredő folyadékkal való kezelés olyan elkülönítési művelet, melynél a protein-fertőz-2o menyeket gél alakjában távolítjuk el és semmiképen sem tekinthető a korionos anyag kivonatolását célzó műveletnek. A vízzel nem keveredő folyadékkal, pl. kloroformmal, való kezelés után a visz-25 szamaradó szérum-nyalkák a vizes rétegből eltávolíthatók és a korionos anyagot valamely ismert eljárással elszigetelhetjük, mint amilyent a 313923. számú brit szabadalmi leírás 1. példájának 68. és köv. so-30 rai, továbbá a 336471. számú brit szabadalmi leírás 1. lapjának 21. és köv. sorai ismertetnek. Előnyösen azonban következőkép járunk el: A szérum-nyalkák és effélék kicsapása 35 előtt a vizes réteget előnyösen körülbelül pH = 6—9 értékre állítjuk be és ezzel a réteggel jelentékeny tömegű, vízzel keveredő semleges szerves folyadékot, mely megfelelő sóval van telítve, hozunk ösz-40 sze avégből, hogy a szérum-nyalkákat kicsapjuk, anélkül, hogy a korionos anyag is kicsapódnék. Ha a kicsapáshoz használt vízzel keveredő szerves folyadék al-. kohol vagy aceton, akkor belőle annyit 45 veszünk, hogy a végleges folyadék alkoholvagy acetonkoncenírációja körülbelül 45— 70°/o, előnyösen körülbelül 60—65«/o legyen. A vízzel keveredő kicsapófolyadékból pontosan szükséges mennyiség némileg 50 attól függ, hogy a szérum-nyalkákat és a korionos anyagot tartalmazó' vizes réteg pH-értéke pontosan mekkora. Alkalmas semleges szerves folyadékok etilalkohol, ^metilalkohol, propilalkobol, tercier buti-55 alkohol, aceton, elilénglikol és számos más olyan vízzel keveredő szerves folyadék^ melyet minden átlagszakértő ismer. A vízzel keveredő, semleges szerves folyadék^ hoz adagolt, valamint a vízzel nem keveredő folyadékkal történő előzetes kezelési 60 fokozatban használt só bármilyen alkalmas só lehet, így pl. nátriumacetát, ná-^ triumszulfát, nátriumklorid, káliumacetát, káliumszulfát, káliumklorid, litium acetát, litiumklorid, magnéziumacetát, magáé- 65 ziumklorid, ammoniumacetát, ammoniumklorid, ammoniumszulfát, kalciumklorid, stb. A kicsapáshoz használt, vízzel keveredő folyadék telítésére rendszerint 0,25— 5»/o-nyi mennyiségű só< elegendő. 70 A szérum-nyalkák alkotta csapadék elválasztása után a korionos anyag kicsapására a vízzel keveredő semleges folyadék, pl. aceton vagy alkohol töménységét legalább az egész folyadék töménységének; 75 körülbelül 75—80°/o-ára vagy még többre növeljük és a pH-értéket 7—8-ra állítjuk be; a kapott csapadékot, mely a korionos anyag mellett körülbelül 85—9Qo/0 sót tartalmaz, előnyösen dializáljuk és ehhez re« 80 generált celljulózahártya alkotta membránt vagy máseffélét használunk. A találmány szerinti eljárásnak számos (előnye van. Gyakorlati szempontból olyan nyersanyagokból, melyek igen kevés, pl. 85 0,1 o/o korionos anyagot tartalmaznak, viszonylag tiszta korionos anyagot szigetelhetünk el. Azt, hogy a kapott termék vijszonylag tiszta és meg nem kötött proteinektől gyakorlatilag mentes, az a tény 90 igazolja, hogy a terméket embereknek adagolva, még 100 EvansHegységnyi vagy ennél nagyobb adagokban sem mutatkoznak antigén reakciók. Az Evans-egység az American Journal of Physiology 100, 144 (1932.) 95 szerint az a mennyiség, mely patkány petefészkének 5-szörös súlynövekedését okozza, ha azt két napon át naponként háromszor szubkulán befecskendezzük, ahol is az állatokat átlagosan 96 órás időszak végén íoo megöljük. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás luteinező és a tüszők növekedését okozó korionos anyag előállítására, azzal jellemezve, hogy a korionos 105 anyagot tartalmazó nyersanyagokat vizes folyadékkal kivonatoljuk, a kapott vizes kivonatot vízzel nem keveredő, szerves folyadékkal savanyú feltételek mellett úgy kezeljük, hogy gél képződ- 110 jék és a korionos anyagot tartalmazó vizes réteget a kapott gél-csapadéktól elkülönítjük.
