Vargha László et al. (szerk.): Beszámoló a Gyógyszeripari Kutató Intézet 10 éves működéséről 1950-1959 (Budapest, 1969)

dr. Horváth István: Anyagcsere vizsgálatok és oxitetraciklin termelési kísérletek Streptomyces rimosusszal

A törzs fenntartására és oltóanyag készítésére két lehetőséget dolgoztunk ki. A kísérletek kezdeti szakában a Streptomyces rimosus gyenge spórázóképessége az irodalomban megadott szilárd táptalajon nagy nehézségeket okozott, és emiatt egy­séges oltóanyag készítése nem volt keresztülvihető. Megfigyeltük azonban, hogy a törzs rendkívül hajlamos spóraképzésre süllyesztett tenyésztési mód mellett. A Streptomyces rimosus, hasonlóan más Streptomycesekhez, először finom fonalú hálózatos telepekben nő, hamarosan azonban apró bacilusokhoz hasonló részek töre­deznek le, amelyek gyorsan spóralánccá alakulnak és szétesnek spórákká. Az oxi­­tetraciklin termelésre kedvező táptalaj körülmények között a micéliális növekedés, a mieéliumok töredezése és a spóraképzés párhuzamosan halad. Ha a termelő táp­talajnál szegényebb és gyorsan felhasználható energiaforrást tartalmazó táptalajon tenyésztjük a Streptomyces rimosust 28°-on rázógépen, a termelt micélium gyorsan szétesik, gyakorlatilag teljesen spórává. A kapott „spóraszuszpenzió”, amely 108— 1010 spórát tartalmaz milliliterenként, —10 C°-on raktározható és oltóanyagként legalább fél évig felhasználható. E spóratermelésre használt táptalaj összetétele : szójaliszt (zsírmentes) 1%, élesztőkivonat1 10%, glükóz 1%, kalciumkarbonát 0,1%, nátriumklorid 0,3%, pH sterilezés előtt 7-es. A tenyésztési idő 4—7 nap lehet. Az e módon történő spóratermelés és raktározás hosszú ideig egységes oltó­­an}Tag készítését teszi lehetővé, amelynek az üzemi termelésben nyújtott előnyeit több éves tapasztalataink igazolják. Xoha az általános mikrobiológiai tapasztalatok szerint a folyékony táptalajon való tenyésztés nagyobb variációs veszéllyel jár, mint a szilárd táptalajon történő, e mikroorganizmus esetében, talán rendkívüli stabilitása folytán a fenti törzsfenn­tartás használhatónak bizonyult. A kísérletek későbbi szakában sikerült megfelelő mértékű spórásodást bizto­sító szilárd táptalajt is találnunk. Azt figyeltük meg, hogy a Streptomyces rimosus szilárd táptalajon való spórásodását bármely nitrogénforrás mellett polialkoholok nagymértékben fokozzák. Legkedvezőbb eredményeket a következő összetételű táptalaj ad : kukoricalekvár (50% szárazanyagtartalmú) 2,5%, élesztőkivonat 5%, glicerin 5%, agar-agar 2%, pH sterilezés előtt 7-es. E táptalajon a megfelelő spórá­­sodás biztosítása érdekében az oltás végzésekor ügyelnünk kell arra, hogy cm2-enként 5—-10 telep fejlődjön ki. Ennél sűrűbb oltás a spórásodást nagymértékben rontja. E táptalajon a Streptomyces rimosus domború, sima, esetleg ráncolódó barna telepekben nő 28°-os termosztátban. A telepek a harmadik nap után lisztszerűen fehér felületűek, majd szürkésfehérek lesznek. A termelt spóra a szokásos módokon raktározható és oltásra felhasználható. Kísérleteink folyamán azonban mindig a sok előnyt nyújtó „rázóspóraszuszpenziót” használtuk oltásra. Törzsjavítási kísérleteink folyamán a szokásos módszereket használtuk. A Streptomyces rimosust besugároztuk ultraibolya fénnyel, továbbá oxitetraciklin­­tartalmútáptalajonszélesztettünk. Az izolált telepeket В táptalajon rázókísérletekben hasonlítottuk össze, a megadott termelési értékek ilyen kísérletek eredményei. A termelésre használt BS-21 jelzésű variánst (termelőképessége 2000/j.g/ml) a kiindu­lási T-jelzésű törzsből (600/xg/ml) ultraibolya besugárzás után izolált B-24-es jelzésű variáns (1200 p,g/ml) oxitetraciklinnel való kezelése után kaptuk. A BS-21 jelzésű variáns erősen érzéketlen ultraibolya és röntgensugarakkal (utóbbi Darvas Jenő dr. [Chinoin] megfigyelése) szemben. Morfológiai és termelési szempontból tulajdonságai nagyon stabilak. E tulajdonságok következtében a ter-1 Élesztőkivonat készítése: 1 kg élesztőt etilacetát segítségével elfolyósítunk, 41 vízzel keverjük és 121°-on 20 percig autoklávban kezeljük. Néhány órai állás után az oldat kissé zavaros felső részét használjuk táptalaj készítéséhez. 164

Next

/
Thumbnails
Contents