Varga Máté - Szentpéteri József (szerk.): Két világ határán. Természet- és társadalomtudományi tanulmányok a 70 éves Költő László tiszteletére - A kaposvári Rippl-Rónai Múzeum közleményei 6. (Kaposvár, 2018)
Csapó János: Új módszer a fosszilis csontok korának meghatározására az aminosavak racemiációja alapján
ÚJ MÓDSZER A FOSSZILIS CSONTOK KORÁNAK MEGHATÁROZÁSÁRA AZ AMINOSAVAK RACEMIZÁCIÓJA ALAPJÁN 37 Az iminosavak szelektív származékképzése. A 80 pl 9.5-es pH-ju 0.1 M borát pufferben feloldott mintához az alábbi oldatokat adtuk hozzá: 8 pl OPA reagens (50 mg OPA és 25 pl merkaptoetanol/ml, acetonitrilben), 8 pl jódacetát, (1M, 0.1M nátrium hidroxidban) és 24 pl FLEC reagens (5mM acetonban). Minden reagens hozzáadása után a reakcióelegyet 80 pl nitrogénnal összekevertük, és az adagolótűt ötször átmostuk. A reakcióidő (beleértve az adagoló tű átmosási idejét is) az OPA és a jódecetsav esetében 4,5 perc, a FLEC reagens esetében pedig 7 perc volt. A reakcióelegyet ezt követően 50 pl dietiléter ötszöri átbuborékoltatásával extraháltuk. 10 perc várakozás után az alsó fázist injektáltuk az oszlopra. Az enantiomerek szétválasztása és meghatározása. A kromatográfiás rendszer egy tisztító oszlopból (Cl 8, 36x4,5 mm belső átmérő, 20 pm részecskeméretű Rsil) melyet a pumpa és a mintaadagoló közé helyeztünk, egy biztonsági oszlopból (RP-8, 15x3,2 mm belső átmérő, 7 pm részecskeméret, Brownlee) melyet a mintaadagoló és az analitikai oszlop közé kötöttük be, és az analitikai oszlopból (300x4,6 mm belső átmérő, 5 pm részecskeméret, Kromasil oktil töltet) állt. A bakteriális tevékenység meggátlására az eluensekhez 100 mg/liter mennyiségben nátrium azidot adtunk. Az a-aminosavak szétválasztására egy három komponensből álló gradiens rendszert alkalmaztunk, melynek összetétele az alábbi volt: A: tetrahidrofurán; B: acetát puffer (1 ml ecetsav/1 I víz, pH beállítás 7.0-re nátrium hidroxiddal); C: acetát puffer (1,8 ml ecetsav/1 I víz, pH beállítás 4,24- ra nátrium hidroxiddal). Az áramlási sebesség 1 ml/perc volt; a gradiens pedig az alábbiak szerint változott az idő függvényében: Idő (perc)A(%) B(%) C(%) 015 85 0 17,016 84 0 1728 0 72 2828 0 72 51,038 0 62 5138 31 31 6140 30 30 7544 28 28 8244 28 28 90,046 27 27 9055 45 0 95,055 45 0 9515 85 0 Az iminosavak szétválasztására és meghatározására ugyanazt az analitikai oszlopot alkalmaztuk, mint az a-aminosavak esetében. Az acetonitril és a 0.1 M foszforsav elegyet használtuk mind a FMOC származékok (acetonitrikfoszforsav, 39:61), mind a FLEC származékok (44:56) elválasztásánál. Az áramlási sebesség 1,5 ml/ perc volt. Az aminosav enantiomerek szétválasztása és meghatározása o-ftálaldehiddel és 2,3,4,6-tetra-O-acetil-l-tio-ßglükopiranoziddal történő származékképzés után Készülék. Az előző pontban leírtaknak megfelelő. Vegyszerek. Az acetonitrilt, a metanolt és a tetrahidrofuránt a Rathburn (Walkerburn, U.K.) cégtől, az aminosav standardokat, az o-ftálaldehidet (OPA) és a 2,3,4,6-tetra-0-acetil-1-tio-ß-glükopiranozidot (TATG) a Sigmától (St. Louis, Mo) vásároltuk. Az elúciós puffereket mono- és dinátrium-hidrogén-foszfátból állítottuk elő. A pH-t nátrium-hidroxiddal állítottuk be. Származékképzés. A reakciót 120 pl-es mikroampullában végeztük, melyet 1,8 ml-es térfogatú, teflonbevonatú belső zárólappal és kupakkal ellátott ampullába helyeztünk. Az automatikus mintaadagolót úgy programoztuk, hogy a 90 pl borát pufferben (0.4M; pH=9.5) oldott mintát (szabad aminosavak vagy nitrogén áramban bepá
