A Magyar Hidrológiai Társaság XXVI. Országos Vándorgyűlése (Miskolc, 2008. július 2-4.)

5. szekció: VÍZELLÁTÁS, VÍZKEZELÉS - Farkas Kata, Törökné Dr. Kozma Andrea, Domokos Klarissza, Varró Mihály, Plutzer Judit, Országos Környezetegészségügyi Intézet: Szeroepidemológiai vizsgálatok: ivóvízben található patogén egysejtű hatása az immunrendszerre

például külföldi utazás, túrázás, kempingezés, fürdőzés, háziállattal, gyermekkel, betegekkel való érintkezés.

Western blot:

Ez a fehérjedektálási módszer kiválóan alkalmas vérszérumban lévő ellenanyag kimutatására. Az általunk használt módszer a LOVELACE Foundation Clinic (Albuquerque, USA) protokollján alapul (Frost és mts, 2000). Első lépésben az antigén fehérjéit SDS-PAGE (nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid-gél-elektroforézis) segítségével méretük szerint szétválasztjuk. Ezután a gélen szétvált fehérjéket blottoljuk polivinilidén-fluorid membránra (PVDF). A membránokat egy többcsatornás készülékbe helyezzük, melynek csatornáiba bemérjük a vérszérumokat (PBS-0.3% TWEEN-oldatban hígítva), majd a készüket egy éjszakán át 4 °C-on, rázatva inkubáljuk.

Ezután a membránokat, melyhez hozzákötött az ellenanyag, 1-1 órán át inkubáljuk, először biotin anti-egér IgG-oldatban, majd sztreptavidin-alkalin-foszfatázban, végül egy előhívó oldatban, mely 5-bromo-4-kloro-3-indolil foszfatázt (szubsztrát) és nitro- tetrazoliumot (kromogén) tartalmaz.

Az így kapott jelek intenzitását lefotóztuk (1. kép), majd digitálisan analizáltuk (Molecular Imager Gel Doc XR, Bio-Rad).

1. kép. Immunoblot eredménye: felső csík: ellenanyag a 27 kDa antigénre, alsó csík: ellenanyag a 15-17 kDa antigén - csoportra-("Formázott

Statisztikai analízis:

A jelek intenzitását pozitív kontrollra standardizáltuk, hogy annak arányában százalékos eredményeket kapjunk. A pozitív kontroll korábbi vizsgálatok során pozitívnak bizonyult _ -- ^Törölt: bizonyunk szérumok_keveréke. Minden membránon ugyanazt a pozitív kontrollt használtuk. A kapott , _ - ^Törölt: t eredményt akkor tekintettük pozitívnak, ha a jel intenzitása meghaladja a pozitív kontroll intenzitásának 30%-át. Megkülönböztettünk gyenge és erős immunválaszt: gyenge a válasz, ha az intenzitás a pozitív kontroll 30-50 %-a és erős, ha ezt meghaladja (>50%).

Az így kapott eredményeket összevetettük a kérdőívből nyert adatokkal, hogy megtudjuk az egyes kockázati tényezőknek van-e szerepe az immunválasz kialakulásában. Először minden tényezőre kontingencia táblázatot írtunk fel. Ez a tábla két vagy több változó közti összefüggés valószínűségét adja meg.

Ez után logisztikus regressziót és Tobit-analízist végeztünk. Előbbit a kontingencia , - -^Törölt: a táblában szignifikánsnak bizonyult adatokra, valamint korra, nemre és településre, utóbbit minden tényezőre.