A Magyar Hidrológiai Társaság XXIV. Országos Vándorgyűlése (Pécs, 2006. július 5-6.)

2. szekció: A VÍZIKÖZMŰVEK HELYZETE - Dr. Vasdinyei Rita, Bogyóné Asztalos M.,Törökné Kozma A., Fodor József Országos Közegészségügyi Intézet: Cianobaktériumok toxintermelésének vizsgálata molekuláris módszerekkel

2. táblázat. A PCR és az RT-PCR során alkalmazott primerek Determináns Primer Szekvencia (5’-3’) Termék (bp) Hivatkozás C. raciborskii

f Cyl2 GGCATTCCTAGTTATATTGCCATACTA Wilson et al. 2000 C. raciborskii

r Cyl4 GCCCGTTTTTGTCCCTTTGCTGC 308 Wilson et al.2000 pks

f M4 GAAGCTCTGGAATCCGGTAA Schembri et al. 2001 pks

r K18 CCTCGCACATAGCCATTTGC 422 Fergusson and Saint, 2003 ps

f M13 GGCAAATTGTGATAGCCACGAGC Schembri et al. 2001 ps

r M14 GATGGAACATCGCTCACTGGTG 597 Schembri et al. 2001 3. táblázat. A PCR-hez használt reakcióelegy összetétele Összetevők Mennyiség 10x reakció puffer 3 μl 50 mM MgCl

2 3 μl Primer

(forward) 1 μl Primer

(reverse) 1 μl Templát DNS 3 μl DyNazyme EXT DNA polimeráz 1U/ μl 0,5 μl dNTP mix (10 mM mindből) 0,3 μl Nukleáz mentes H

2

O 18,2 μl A PCR paraméterei a következőek voltak: a bevezető egyszálúsítási szakasz 94 °C 10 perc, amelyet egy 55-ször ismétlődő ciklus követett. Ez a ciklus egy 30 másodpercig tartó 94 °C-os egyszálúsítási szakaszból, egy 30 másodperces 45 °C-os primer kötődési szakaszból és egy 1 percig tartó 72 °C-os primer hosszabbodási szakaszból állt. Ezt egy 1 percig tartó 72 °C-os végső lánchosszabbítás követett. 4. táblázat. Az RT-PCR-hez használt reakcióelegy összetétele Összetevők Mennyiség 10x reakció puffer 5 μl 50 mM MgCl

2 1,5 μl Primer

(forward) 1 μl Primer

(reverse) 1 μl Templát RNS 3 μl AMV reverz transzkriptáz 1 μl DyNazyme EXT DNA polimeráz 1U/ μl 2 μl dNTP mix (10 mM mindből) 1 μl RNáz mentes H

2

O 34,5 μl 3