Fogorvosi szemle, 2017 (110. évfolyam, 1-4. szám)
2017-09-01 / 3. szám
83 FOGORVOSI SZEMLE ■ 110. évf. 3. sz. 2017. tív extracelluláris mátrixhoz (ECM), illetve sem maguk, sem bomlástermékeik nem toxikusak és nem váltanak ki gyulladásos válaszreakciókat a szervezetben [17]. Felhasználási területeik között jelentős szerepet kap a sejtek vagy hatóanyagok szállítása, illetve ezeknek az alkalmazás területén történő szabályozott kibocsátása. Ennek egyik legegyszerűbb esete, amikor a hatóanyagot egyenletesen eloszlatva belekeverik a kontrollált leadást végző hidrogél mátrixba. Az eloszlatott molekulák felszabadulásának sebessége és a hidrogélek fizikai paraméterei befolyásolhatók, a keresztkötések arányával, a felhasznált keresztkötő-anyagok, aktivációs ágensek mennyiségével, esetleg a kialakított anyag pórusméretének beállításával az igényekhez igazíthatok. A szabályozott hatóanyag-leadásra képes rendszerekkel elérhető a hatóanyag jelentétének elnyújtása és lokális koncentrációjának szabályozása. Ezen rendszerek megfelelő védelmet biztosíthatnak a tárolt hatóanyag inaktiválódása ellen, amely állandóan jelenlévő nehézség biológiai rendszerekben. A természetes polimerek közül a hialuronsav (HA) az egyik legintenzívebben kutatott poliszacharid, amely az ECM egyik fő komponense a bőrben, a porcszövetben, és egyéb szervekben is fellelhető. Az ECM természetes makromolekuláris komponenseként biokompatibilis és több kötőhelyet is tartalmaz adhéziós molekulák számára. A HA fontos szerepet játszik a sebgyógyulásban, a regenerációban [7], és az embrionális őssejtek differenciációját, proliferációját és túlélését is támogatja [13]. A HA-oldat ugyanakkor szokatlanul magas viszkozitású és felületi feszültségű, így még alacsony koncentráció mellett is nehézkessé teszi az alkalmazását. A polimer oldat viszkozitása csökkentésének egyik legkézenfekvőbb módja a hialuronsav térhálósítása, melyet két vagy többfunkciós keresztkötő molekulák alkalmazásával, kémiai kötések kialakításával érhetünk el [2-5]. A módosítások során fontos törekedni arra, hogy az új, előnyös tulajdonságok kialakítását követően a szintetizált terméknek megmaradjon a biológiai aktivitása, és továbbra se váltson ki immunreakciót. Az optimálisan kialakított HA-alapú gélek ígéretes mátrixként szolgálhatnak hatóanyagok célba juttatására. Fogászati műtéteket követően kialakult sebekre, illetve erek mellé helyezve alkalmazhatók különböző gyógyszermolekulák bejuttatására [6, 9, 11]. Ezen munka célja olyan különböző mértékben keresztkötött hialuronsav-diamin (HADA) rendszerek előállítása és vizsgálata, amelyek a jövőben akombinált, a fogászat területén is alkalmazható hatóanyag-leadó rendszerek fejlesztésének alapját képezhetik. Anyagok és módszerek A szintézis során felhasznált anyagok: hialuronsav Nasója (HA-Na, Mw = 1,63 x 103 kDa), 2,2’(etiléndioxi)bisz (etilamin) (DA, Mw = 148,20 Da), 1-[3-(dimetil amino)propil]-3-etil karbodiimid metil jodid (EDC, Mw = 191,70 Da), 1-hidroxibenzotriazol (HOBt, Mw = 135,12 Da). A kioldódásvizsgálatok során modellvegyületként metilénkéket (MK) alkalmaztunk. Minden vegyszer a Sigma- Aldrich Kft.-tői (St. Louis, Egyesült Államok) került beszerzésre. Hialuronsav térhálósítása 2,2’(etiléndioxi)bisz(etilamin)-nal A különböző mértékben térhálósított HA előállításához DA-t alkalmaztunk keresztkötőként. A reakciókat vizes közegben, vízoldható karbodiimid (karboxilcsoport aktiválása) és benztriazol (racemizáció elkerülése) reaktánsok jelenlétében végeztük 2,5 mg/ml kiindulási polimer-koncentráció alkalmazásával, a pH-t 5,5 értékre beállítva, 24 óra reakcióidőt alkalmazva. térhálósításának mechanizmusa A térhálósítási reakció paraméterei (az EDC, HOBt és a DA koncentrációk, illetve a keresztkötési arány) az 1. táblázatban szereplő adatok szerint kerültek kialakításra. A HADA25/50/75/100 hármas jelölésű rövidítésben, a HA kezdőbetűk a hialuronsavat, az azt követő DA betűk a diamint jelölik, míg a szám az elméleti keresztkötési rátára utal. Az el nem reagált komponensek Vivaflow membránszűrővel (100 kDa PES) (Sartorius, Göttingen, Németország) kerültek eltávolításra. A szilárd anyag kinyerése liofilizálással (Christ Alpha 1-2 LD, Martin Christ Gefriertrocknungsanlagen GmbH, Osterode am Harz, Németország) történt.
