Fogorvosi szemle, 2017 (110. évfolyam, 1-4. szám)
2017-09-01 / 3. szám
84 FOGORVOSI SZEMLE ■ 110. évf. 3. sz. 2017. 1. táblázat A hialuronsav térhálósítási reakcióinak fő paraméterei. Hialuronsav (mg) Térhálósítás sztöchiometriai mértéke (%) Diamin (pl) EDC (mg) HOBt (mg) Jelölés 500 25 24 32 22 HADA25 500 50 48 64 44 HADA50 500 75 72 96 66 HADA75 500 100 96 128 88 HADA100 Térhálósított hiaiuronsav-származékok jellemzése A térhálós HA-származékok szerkezetének megállapítása 13C mágneses magrezonancia (13C-NMR) (Bruker 500SY, Bruker Daltonic GmbH, Németország) spektroszkópiai mérések segítségével történt. Az NMR-mérésekhez oldószerként deutérium-oxidot (D20) használtunk. Referenciaanyagként tetra-metil-szilánt (TMS) (5 = 0 ppm) alkalmaztunk, a vizsgált minta kémiai eltolódás (5) értékei ennek a jeléhez lettek viszonyítva. A polimer részecskék hidrodinamikai átmérőjének meghatározása dinamikus fényszórás (DLS, Dinamic Light Scattering) (BI-200SM, Brookhaven Instruments Corporation, New York, Egyesült Államok) fotométerrel történt. A hidrodinamikai átmérőt foton korrelációs spektroszkópia (PSC, Photon Correlation Spetrocsopy) elvén mértük és a Stokes-Einstein egyenlettel számoltunk: d(H) = kT/3irfjD, ahol: d(H) = hidrodinamikai átmérő, D = transzlációs diffúziós együttható, k = Boltzmann állandó, T = hőmérséklet és p = viszkozitás. A mérési eredmények értékelése az NNLS (non negative constrained least squares/legkisebb négyzetek) módszerrel történt.A szilárd állapotú részecskék méretének és morfológiájának meghatározása transzmiszsziós elektronmikroszkóppal (TEM) (JEOL 2000 FX-II, Jeol Ltd., Akishima, Japán) készített felvételek alapján történt. A minták vizsgálata szénréteggel bevont G2400C típusú rézhálón történt, a qyorsítófeszültséq 80 kV volt. Az in vitro kioldódási dinamika tanulmányozására modellvegyületként a széles körben alkalmazott MK-et használtuk. A vizsgálat 12 lyukú platebe helyezett, 0,4 pm pórusméretű, PÉT sejttenyésztő betétben (Millicell, Merck KGaA, Darmstadt, Németország), folyamatos rázatás (100 RPM) mellett (NB-205 síkrázó inkubátor, N-Biotek Co., Ltd., Gyeonggi-do, South Korea) szobahőmérsékleten, ötnapos vizsgálati periódus meghatározásával valósult meg. Először az 1 mg/ml-es MK- oldatot készítettük el, majd az 1 m/m%-os géloldatokat (HA, HADA25/50/75/100) a MK-et tartalmazó oldat felhasználásával, 10 m/m%-os MK koncentrációt kalkulálva az egyes gélekre, majd minden betétbe 10 mg minta került bemérésre. A MK leadásának nyomon követésére spektrofotometriás módszert (Hidex, Turku, Finnország) alkalmaztunk. Oldószerként/ duzzasztószerként és kioldóközegként (2 ml) ioncserélt vizet használtunk. Minden mintavételi pontban a teljes kioldóközeg lecserélésre került. A spektrofotometriás mérés 661 nm-en történt. Eredmények Az előállított anyagok vizsgálatai azt mutatták, hogy sikerült különböző mértékben térhálósított hialuronsavszármazékokat létrehozni. Térhálósítóként egy hosszabb szénláncú diamint választottunk, mellyel a térhálósítás mértékének a növelését kívántuk elősegíteni, illetve a reakció számított (sztöchiometriai) és valós mértékének a közelítését. A térhálósítás során a HA karboxilcsoportjai reagálnak a térhálósító DA amino-csoportjaival kovalens savamid/peptid kötést képezve. A szintézist karbodiimid és benztriazol aktiváló ágensekkel egészítettük ki. A keletkező térhálós szerkezet tanulmányozása NMR spektroszkópiával történt. A HA és a 100%ban térhálósított nanorészecske (HADA100) 13C-NMR spektrumainak összehasonlítása során a kémiai jelek eltolódása, valamint a keresztkötő diaminra jellemző jelek jól azonosíthatók. A térhálósított származék spektrumában megjelenő, a diaminra jellemző kémiai eltolódások (5 = 67,54 (C1), 5 = 70,33 (C2), 5 = 40,04 (C3)) 2. ábra: A hialuronsav (HA) és az elméletileg 100%-ban keresztkötött hialuronsav (HADA100) 13C-NMR spektrumainak összehasonlítása
