Fogorvosi szemle, 2011 (104. évfolyam, 1-4. szám)

2011-03-01 / 1. szám

FOGORVOSI SZEMLE

104. évf. 1.SZ. 2011.

13

távolítottul majd a sejtekre RPMI tápfolyadékban oldott, 0,5 mg/ml koncentrációjú MTT (Sigma-Aldrich GmbH, Németország) festéket mértünk, amellyel a sejteket 4 órán át inkubáltuk, 37 °C-on. Ezután a felülúszót óvatosan eltávolítottuk, majd a kristályokat 2%-os sodium dodecyl szulfát oldatban (SDS) és 0,04 mM sósavas isopropanolban feloldottuk. Az optikai denzitást (OD) 540 nm-nél mértük Multiscan Ex spektrofotométer (Thermo Labsystems, Vantaa, Finnország) és Ascent Software (Thermo Labsystems, Vantaa, Finnország) segítségével.

A fehérjemennyiség meghatározását (élő és elhalt sejtekből) „micro BCATM protein assay kit”-tel (Pierce, Rockford, IL, USA) végeztük. A fehérjemérés standardjaként borjúszérum-albumint (Pierce, USA) használtunk. A sejteket lízis pufferrel feltártuk (20 mM Tris-HCI, pH 7,5; 150 mM NaCI, 1 mM Na2EDTA, 1 mM EGTA, 1% Triton X-100, 2,5 mM sodium pyrophosphate, 1 mM ß-glycerophosphate, 1 mM Na3V04 és 1 pg/ml leupeptin), majd rámértük a zöld színű reagenst. Az oldatot 2 órán át inkubáltuk 37 °C-on. Az oldat lila színűvé vált a benne lévő fehérje mennyiségével arányosan. Az opnm

300 -200 •

100

File Name

UK5C090 . ography006 tiff

Head Mode

C-AFM

Source

Topography

Data Width

256 (pxl)

Data Height

256 (pxl)

X Scan Size

10 (pm)

Y Scan Size

10 (ym)

Scan Rate

2 (Hz)

Set Point

2 (nN)

Data Gain-152.59E-6 (ym/step)

File Name

UK4G090...ography003.tiff

Head Mode

C-AFM

Source

Topography

Data Width

256 (pxl)

Data Height

256 (pxl)

XScan Size

10 (ym)

Y Scan Size

10 (ym)

Scan Rate

2 (HZ)

Set Point

1.19 (nN)

Data Gain-152.59E-6 (ym/step)

3 a-b. ábra

Túltelített citromsawal (pH = 1) (A) és klórhexidin (CHX) géllel kezelt korongok (B) felülete látható a háromdimenziós AFM felvételeken. Méret: 10x10 pm