Szemészet, 2009 (146. évfolyam, 1-4. szám)
2009-06-01 / 2. szám
44 Szemészet abszolút citokinkoncentrációk. Szaruhártya-kilökődési reakció esetén a citokin- és kemokinexpresszió változásait állatmodellekben mind mRNS,16,21 mind fehérje15,20 tekintetében vizsgálták, és humán fehérjevizsgálatokról is beszámoltak.5,6,13 Vizsgálataink során célul tűztük ki, hogy pro- (interleukin-6 [IL-6]) és anti-inflammatorikus (interleukin-10 [IL-10]) citokineket határozzunk meg perforáló keratoplasztikán átesett betegek könnyéből. Célunk volt továbbá összehasonlítani a citokinek szintjét a komplikációmentes és a kilökődési reakción átesett betegek esetében. Betegek és módszerek Tizenkét perforáló keratoplasztikán átesett beteg érintett szeméből 14 hónapon keresztül, meghatározott rendszerességgel stimulálás nélkül könnymintát gyűjtöttünk. A vizsgálati csoportot a Debreceni Egyetem Orvos- és Egészségtudományi Centrum Szemklinikájának betegei biztosították, a betegek átlagéletkora 45,0 év volt (18-70 év között, SD 14,2). A betegek adatait és a PKP indikációit az 1. táblázat tartalmazza. A vizsgálatba bevontak nem szedtek olyan gyógyszert, amely befolyásolta volna a könnytermelést, valamint immunológiai eredetű betegségben sem szenvedtek. A helsinki deklarációt betartva, a betegek beleegyezésével történtek a könnymintavételek. A donor corneákat maximum egy hétig tároltuk Optisol-GS-ben (Bausch&Lomb, USA). Könnygyűjtés előtt réslámpával minden beteget megvizsgáltunk, alacsony fényerő mellett, hogy a reflexes könnyezést elkerüljük. A könnygyűjtés a műtét napján, majd az első, harmadik és hetedik posztoperatív napon reggel 7.30 és 8.00 között, az első cseppentés előtt történt, majd ezt követően minden egyes szemészeti kontroll alkalmával. Stimulálás nélkül, atraumatikusan steril üvegkapillárisba gyűjtöttük a könnymintákat, érzéstelenítő csepp adása nélkül, az alsó könnymeniscusból, ügyelve arra, hogy a szemfelszínt és a szemhéjat ne érintsük. A mintavételi idő minden esetben pontosan 2 perc volt, a levett könny mennyiségét feljegyeztük. A levett könnymintákat 15 percen belül, centrifugálás nélkül -80 °C-ra fagyasztottuk le a felhasználásig. A pipettázási és hígítási hibák elkerülésére azokat a könnymintákat, amelyek 4 pl alattiak voltak, kizártuk a vizsgálatból. Néhány esetben „száraz szem” miatt nem tudtunk könnymintát gyűjteni. Rejekció esetében a könnymintavétel az immunszuppresszív terápia alkalmazása előtt megtörtént. Összesen 105 könnymintát értékeltünk. Cornealis endothelialis rejekciót akut gyulladásos epizód esetén diagnosztizáltunk, amennyiben vagy endothelialis precipitátumokat és/ vagy stromaödémát megnövekedett centrális cornealis vatagsággal igazoltunk. Az IL-6 és IL-10 citokinek koncentrációját cytometric bead array (CBA) technika (BD Biosciences Pharmigen, San Diego, CA) alkalmazásával áramlási citométerrel végzett mérések alapján határoztuk meg. Az ismert koncentrációjú humán citokin standardminták további hígításával a gyártó által garantáltnál nagyobb szenzitivitást sikerült elérnünk: IL-6 esetén 0,04 pg, IL-10 esetén 0,02 pg volt a mérési határ. A könnyminták térfogatát, a citokinek koncetrációját és az IL-6/ IL-10 arányt Wilcoxon-teszt segítségével hasonlítottuk össze a rejekción átesett és a komplikációmentes szaruhártya-átültetések esetei között. A betegcsoportonkénti átlagos citokinkoncentrációk időbeni lefutását helyi súlyozású regressziós simításos elemzéssel határoztuk meg (magyarázó változóként a napban mért követési időt véve). Az így kapott görbéket vonaldiagrammon ábrázoltuk. A szignifikanciaszintet minden esetben 0,05 alatti p-értéknél határoztuk meg. Eredmények Szaruhártya-átültetést követően 14 hónapon belül 3 betegben transzplantátumrejekció következett be, míg 9 betegnél a corneák komplikáció nélküliek maradtak. Mind a három kilökődött cornea esete a nagy kockázatú szaruhártya-átültetések közé tartozott. Az immunrejekció az átültetést követő 216., 422., valamint 83. napon lépett fel. A kilenc komplikációmentes PKP közül kettő nagy, hét kis rizikójú csoportba tartozott (1. táblázat). A két perc alatt gyűjtött könnyminták mennyisége között a rejekciós és komplikációmentes eseteket összehasonlítva nem találtunk szignifikáns különbséget (p=0,096). Habár a betegek között a citokinkoncentrációkban nagy volt a különbség, az időbeli változások hasonló, jellegzetes mintázatot mutattak a vizsgált posztoperatív időszakban. A műtét maga gyors citokinkiáramlást okozott, mely minden esetben kimutatható volt. A korai poszt-1. táblázat. A betegek adatai és a szaruhártya-átültetés (PKP) indikációi Beteg Kor (év/nem) PKP indikációja Korábbi immunreakció PKP és a rejekció közötti napok 1. 24 8 Keratoconus _ 2. 55 9 Keratitis herpetica, leucoma vascularisata corneae, rejectio transplantati (re-PKP) +-3. 70 $ Degeneratio nodulare sec. Salzmann-4. 18 $ Dystrophia hereditaria endothelialis corneae-5. 59 9 Keratopathia bullosa, rejectio transplantati (re-PKP) +-6. 47 8 Keratopathia bullosa-7. 31 8 Keratoconus-8. 22 9 Keratoconus-9. 60 9 Degeneratio nodulare sec. Salzmann-10. 56 8 Keratitis herpetica, rejectio transplantati (re-PKP) + 216 11. 52 9 Dystrophia corneae reticulata Haab-Dimmer, recidiv. dystrophia (re-PKP) — 422 12. 46 9 Keratitis superficialis chronica (pannus)-83 Fodor Mariann
