Szemészet, 2003 (140. évfolyam, 1-4. szám)

2003-06-01 / 2. szám

140. évfolyam (2003)

85

2. táblázat. A glaucomás betegcsoport haemorheologiai paramétereinek vizsgálata a csak glaucomas, valamint a társbetegségekkel is együtt járó betegcsoportokban (hypertonia, diabetes mellitus, ISZB) a kon trollcsoport

eredményeihez viszonyítva

Kontrol]

Glaucomás

Glaucomás+egyéb

Életkor (év)

36±6

54±8

63±5

Nem (férfi/nő)

30/38

5/7

7/6

Hematokritérték (%)

40,70±3,30

43,20+2,60*

46.50+1,80**

Plazmafibrinogén (g/1)

2,53±0,91

3,78+0,62**

4.12±0,72**

Plazmaviszkozitás (mPas)

1,18±0,08

1,48±0,03**

1,52+0,05**

A teljes vér viszkozitása

(90 1/s) (mPas)

3,87±0,33

4,65±0,23**

4,86+0,21**

*p<0,01; **p<0,001

A beépített termosztát segítségével a mérőcsövek hőmérséklete folyamatosan 37 °C-on tartható. A viszkoziméterben kialakuló nyomásgrádiens a folyadék saját hidrosztatikus nyomásából származik, mely a mérés során folyamatosan csökken. A kiértékeléshez a meniszkusz pontos helyzet-idő diagramját egy opto-elektronikus rendszer érzékeli, s a műszer egy interface-en keresztül számítógéphez csatlakozik. A folyási görbéből az e célra készített software segítségével számolható a viszkozitás értéke. Az értékelés során, a hazai és nemzetközi konvencióknak megfelelően, a 90 1/s sebességgrádiensnél mért adatokat használtuk. Mérési módszerünkkel a látszólagos teljes vér viszkozitás normál értékének felső határa 4,5 mPas, míg plazma esetén ez 1,3 mPas.

1.2. A hematokrit- (htc-) érték meghatározása: Heraeus (Németország) mikrohematokrit centrifugával.

1.3. A fibrinogénszint mérése: nefelometriás módszerrel.

2. Rheologiai modell a szabadgyök-generátor PMS (phenazin-methosulphat) membránkárosító hatásának és a gyógyszeres védelem lehetőségeinek detektálására

2.1. Vérminták előkészítése: Egészséges önkéntesektől 40 ml vénás vért vettünk Vacutainer rendszerrel, a cubitalis vénából, melyet Na-heparinnal antikoaguláltunk. A teljes vért 2500 g-n 10 percig centrifugáltuk, a plazmát és a buffy coatot eltávolítottuk, majd a vörösvérsejteket PBS-sel (phosphate buffered saline; pH 7,4; ozmolaritás 300 mOsm: 10 mM glukóztartalom) kétszer mostuk. Az utolsó mosást követően a felülúszót eltávolítottuk és a vörösvérsejteket ismételten reszuszpendáltuk PBS pufferben. A minták (a kontrollminta kivételével) 1 mM PMS-ot, a gyógyszerrel kezelt minták egy gyógyszer adott koncentrációját is tartalmazták. A 20%-os htc-ra beállított mintákat folyamatos, lassú keverés mellett 37 °C-on 120 percig inkubáltuk. Az inkubációt követően a mintákat 2500 g-n 10 percig centrifugáltuk, majd a felülűszó eltávolítása után a íiltrációs méréseket PBS pufferrel 10%-os htc-ra beállított mintákon végeztük.

2.2. A timolol (Sigma) védőhatásának vizsgálata: 4-4 ml mintát inkubáltunk vízfürdőben 37 °C-on 2 órán keresztül;

1. kezelés nélkül;

2. +1 mM PMS;

3. +1 mM PMS +3 pM (1,3 mg/ml) timolol;

4. +1 mM PMS +15 pM (6,5 mg/ml) timolol.

Az inkubáció 0. és 120. percében mintát vettünk az extracelluláris Na+- és K+-szintek meghatározására.

2.3. A vvs-deformabilitás mérése: A vörösvérsejtek deformabilitását (RCTT - relative cell transit time) St. George’s elven működő Carat FT-1 filtrométerrel (CARAT Kft., Budapest) mértük. A mérőműszerben a vörösvérsejt-szuszpenzió 5 pm pórusnagyságú Nucleopore filteren áramlik keresztül, az áramlást a folyadékoszlop hidrosztatikai nyomása tartja fenn. A íiltrációs rátát négy pár fényforrás és detektor méri. A komputerizált rendszer automatikusan analizálja az átfolyás arányát, s ezen keresztül az eltömeszelődési rátát. Kísérleteinkben 4 vízcm-es íiltrációs nyomást alkalmaztunk. Valamennyi mérést szobahőmérsékleten végeztük, és mindegyik mintán háromszor ismételtük.

2.4. A felülúszó káliumkoncentrációjának meghatározása: A vizsgálatokat OMSZÖV OE 581 (OMSZÖV, Magyarország) digitális lángfotométerrel végeztük.

3. Betegek

Alacsony nyomású simplex glaucomás betegek haemorheologiai paramétereinek vizsgálata: 25 glaucomás beteg (átlagéletkor: 54±8 év).

Simplex glaucomás betegek haemorheologiai paramétereinek összehasonlító vizsgálatánál: 68 egészséges kontroll (átlagéletkor: 36±6 év).

Egészséges önkéntesek az in vitro mérésekhez: 6 fiatal férfi (átlagéletkor: 29±4 év).

4. Statisztikai értékelés

Az adatokat középérték, SD, SEM és Student-féle „t”-próba segítségével értékeltük, a p<0,05 eltéréseket tekintettük statisztikailag szignifikánsnak.

Haemorheologiai faktorok és oxigén szabad gyökös reakciók simplex glaucomában